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反相色譜柱是迄今在液相色譜中應(yīng)用的技術(shù)，主要是因?yàn)樗m用于分析絕大多數(shù)的非性物質(zhì)和多的可離子化的及離子化合物。做好反相色譜柱使用及維護(hù)工作，可可以延長(zhǎng)色譜柱使用壽命。
1、在條件允許情況下，在使用前盡量對(duì)色譜柱按照說(shuō)明書(shū)方法進(jìn)行柱效測(cè)試。以確保色譜柱的正常。
2、硅膠基質(zhì)色譜柱使用溫度應(yīng)低于60℃。
3、樣品：盡量將樣品溶解在流動(dòng)相或性相近的溶劑中。如果使用梯度洗脫，則需要將樣品溶解在初始流動(dòng)相或性相近的溶劑中。樣品溶液不應(yīng)含有任何顆粒物，盡量使用0.5μm或更小粒徑的濾膜過(guò)濾。樣品溶液如果使用溶劑(例如，流動(dòng)相為水，樣品溶劑為甲醇)，為達(dá)到較好峰形，需要降低進(jìn)樣量
4、流動(dòng)相：流動(dòng)相，是含有緩沖鹽的流動(dòng)相，盡量當(dāng)日實(shí)驗(yàn)當(dāng)日配制；如果使用了前日配制的流動(dòng)相，請(qǐng)確保流動(dòng)相pH值沒(méi)有變化，并確保流動(dòng)相沒(méi)有長(zhǎng)菌。 流動(dòng)相的pH值取決于您的應(yīng)用和色譜柱填料類(lèi)型。我們建議在的色譜柱盡量在pH2~8范圍內(nèi)使用。請(qǐng)盡量避免在常規(guī)流動(dòng)相中使用比例的水(>95%)作為流動(dòng)相，可能會(huì)造成保留時(shí)間的不穩(wěn)定或者色譜柱鍵合相的損害。
5、色譜柱平衡：在進(jìn)行分析之前，請(qǐng)使用至少20倍柱體積的流動(dòng)相沖洗色譜柱，以使色譜柱達(dá)到平衡。
6、色譜柱保護(hù)：對(duì)于“臟”的樣品以及組分未知的樣品，請(qǐng)盡量使用在線濾器或保護(hù)柱，如果可能，使用SPE小柱對(duì)樣品進(jìn)行前處理是較好的選擇。
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