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產(chǎn)品簡介：

小反芻獸疫（Peste des petits ruminants，PPR）是由副黏病毒科、麻疹病毒屬的小反芻獸疫病毒（Peste des petits ruminants virus，PPRV）引起的一種高度接觸性傳染病，主要感染綿羊、山羊，野生小反芻動物也可被感染，是危害養(yǎng)羊業(yè)最重要的疫病之一。由于 PPR 的發(fā)病率和死亡率較高，國內普遍采取了免疫 Nigeria 75/1 弱毒疫苗的主動預防措施，但是 Nigeria 75/1 疫苗為活病毒疫苗，動物免疫后在短時間內會出現(xiàn)排病毒現(xiàn)象，這給該病的病原學監(jiān)測造成了干擾。PPRV 只有一個血清型，目前血清學還無法區(qū)分是野毒感染還是疫苗免疫，這給鑒別診斷也帶來了困難。

本試劑盒適用于檢測的羊的腸系膜和支氣管淋巴結、脾、肺、大腸等組織、眼睫膜拭子、口鼻-拭子、血清   等標本中小反芻獸疫病毒疫苗株，適用于小反芻獸疫病毒疫苗株感染的輔助診斷。

產(chǎn)品特點：

一、嚴格的質控體系

所有試劑盒從原料到成品都經(jīng)過嚴格的質量控制，確保每一盒試劑盒都具有穩(wěn)定可靠的質量，讓您的檢測結果更可信。

二、高靈敏度

產(chǎn)品經(jīng)過不斷優(yōu)化，具有出色的靈敏度，能夠檢測到極微量的小反芻獸疫病毒疫苗株核酸，不放過任何潛在的感染風險。

三、便捷操作

綜合各項指標特性，研發(fā)出操作便捷的試劑盒。從樣本制備到結果分析，每一步都有清晰的操作指南，即使是新手也能輕松上手。

四、多樣的檢測驗證樣本

該試劑盒經(jīng)過多種樣本的檢測驗證，適用于腸系膜和支氣管淋巴結、脾、肺、大腸等組織、眼睫膜拭子、口鼻-拭子、血清 等多種常見樣本，滿足不同的檢測需求。

五、個性化定制服務

專業(yè)的研發(fā)團隊可為您提供個性化的定制服務，根據(jù)您的特殊需求進行產(chǎn)品優(yōu)化和調整，為您提供更貼合實際的檢測方案。

六、豐富的產(chǎn)品線

除了小反芻獸疫病毒疫苗株(PPRV-V)PCR試劑盒，我們還提供Elisa試劑盒以及其它快檢試劑盒，滿足您在不同領域的檢測需求。

七、完善的售前售后服務

我們擁有完善專業(yè)的售前售后服務團隊，在您購買前為您提供詳細的產(chǎn)品咨詢和技術支持，購買后為您解決使用過程中遇到的任何問題，讓您無后顧之憂。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

50T/盒，可滿足一定規(guī)模的檢測需求。

檢測方法

實時熒光PCR，具有快速、準確、靈敏等優(yōu)點。

適用儀器

ABI7500、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

標本采集

選擇處于發(fā)熱期(體溫 40℃~41℃)，排出水樣眼分泌物、出現(xiàn)口腔潰瘍、無腹瀉癥狀的活畜采集樣品。采集結膜棉拭子 2 個，鼻粘膜棉拭子 2 個，頰部粘膜棉拭子 1 個，分別放在 300μL 滅菌的 0.01mol/L pH7.4 磷酸鹽緩沖液(PBS)中。無菌采集血液 10mL，用常規(guī)方法分離血清。

選擇剛被撲殺或者死亡時間不超過 24h 的病畜采集組織樣品。無菌采集腸系膜和支氣管淋巴結各 3 個~4 個， 脾、胸腺﹑腸粘膜和肺等組織各約 25g~50g，分別置于 50mL 離心管中。肉制品取 25 g~50 g，置于 50 mL 離心 管中。

保存和運輸

采集或處理好的樣品在 2℃~8℃條件下保存應不超過 24 h；若需長期保存，應放置-70℃以下保存，凍融不超過 3 次。

使用方法：

1.樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1樣本前處理

將棉拭子充分捻動，擠干后棄去拭子，取 100μL 樣品液至一新的離心管中；取少量樣品（2~3 g）于研缽或勻漿器中研磨，加 10 mLPBS 混勻，然后將研磨勻漿轉入無菌離心管中，4℃，3000 r/min 離心 10 min 取上清液轉入無菌的 1.5 mL 離心管中，編號待檢；血液樣品靜置后取上清于 1.5mL 滅菌離心管中待檢。

1.2核酸提取

推薦采用公司生產(chǎn)的核酸-提取或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進行核酸提取，   請按照試劑說明書進行操作。

2.試劑配制（試劑準備區(qū)）

根據(jù)待檢測樣本總數(shù)，設所需要的 PCR 反應管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照；樣品每滿

10 份，多配制 1 份)，每測試反應體系配制如下表：

試劑PPRV-V 反應液酶液

用量（樣本數(shù)為 N）19μL1μL

將混合好的測試反應液分裝到 PCR 反應管中，20μL/管。

3.加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的核酸、陽性質控品、陰性質控品各取 5μL，分別加入相應的反應管中，蓋好管蓋，混勻， 短暫離心。

4.PCR 擴增（核酸擴增區(qū)）

4.1將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內；

4.2設置好通道、樣品信息，反應體系設置為 25μL；熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光，選擇 None 即可。

4.3推薦循環(huán)參數(shù)設置：

步驟循環(huán)數(shù)溫度時間收集熒光信號

11 cycle50℃10min否

21 cycle95℃2min否

345 cycles95℃15sec否

60℃30sec是

5.結果分析判定

5.1結果分析條件設定（請參照各儀器使用說明書進行設置，以分析 ABI7500 儀器為例）

反應結束后自動保存結果，根據(jù)分析后圖像調節(jié) Baseline 的 Start 值、End 值以及 Threshold 值（用戶可根據(jù)實際情況自行調整，Start 值可設在 3～15、End 值可設在 5～20，使閾值線位于擴增曲線指數(shù)期，陰性質控品的擴增曲線平直或低于閾值線），點擊 Analyze 自動獲得分析結果。

5.2結果判斷

陽性：檢測通道 Ct 值≤40，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線； 陰性：樣本檢測結果 Ct 值>40 或無 Ct 值。

5.3質控標準

陰性質控品：無特異性擴增曲線或無 Ct 值顯示；

陽性質控品：擴增曲線有明顯指數(shù)增長期，且 Ct 值≤32； 以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效。

6.檢測方法的局限性

1.樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質量有關；

2.樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現(xiàn)假陽性結果；

3.陽性對照、擴增產(chǎn)物泄漏，會導致假陽性結果；

4.病原體在流行過程中基因突變、重組，會導致假陰性結果；

5.不同的提取方法存在提取效率差異，會導致假陰性結果；

6.試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準確的結果；

7.本檢測結果僅供參考，如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。

注意事項：

1.所有操作嚴格按照說明書進行；

2.試劑盒內各種組分使用前應自然融化，完-全混勻并短暫離心；

3.反應液應避光保存；

4.反應中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；

5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服；

6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行，以免交叉污染；

7.實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；

8.試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全通則》進行處理。

9.本產(chǎn)品僅供科研。

選擇我們的小反芻獸疫病毒疫苗株(PPRV-V)PCR試劑盒，就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！