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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

豬傳染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放線桿菌（Actinobacillus pleuropneumoniae, APP）引起的一種以急性胸膜肺炎為特征的豬的呼吸道傳染病。病理特征是纖維性胸膜肺炎和出血壞死性肺炎。該病多以最急性型發(fā)生，并很快引起豬的死亡，慢性型的導(dǎo)致生長(zhǎng)緩慢，成為僵豬，降低飼料報(bào)酬，造成很大經(jīng)濟(jì)損失。熒光PCR技術(shù)法因其簡(jiǎn)便、快捷、靈敏度高、特異性強(qiáng)成為APP檢測(cè)的主要手段之一。

本試劑盒適用于檢測(cè)氣管分泌物拭子、肺組織等樣本中的傳染性胸膜肺炎放線桿菌，用于傳染性胸膜肺炎放線桿菌感染的輔助診斷。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

一、嚴(yán)格的質(zhì)控體系

所有試劑盒從原料到成品都經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量控制，確保每一盒試劑盒都具有穩(wěn)定可靠的質(zhì)量，讓您的檢測(cè)結(jié)果更可信。

二、高靈敏度

產(chǎn)品經(jīng)過不斷優(yōu)化，具有出色的靈敏度，能夠檢測(cè)到極微量的傳染性胸膜肺炎放線桿菌核酸，不放過任何潛在的感染風(fēng)險(xiǎn)。

三、便捷操作

綜合各項(xiàng)指標(biāo)特性，研發(fā)出操作便捷的試劑盒。從樣本制備到結(jié)果分析，每一步都有清晰的操作指南，即使是新手也能輕松上手。

四、多樣的檢測(cè)驗(yàn)證樣本

該試劑盒經(jīng)過多種樣本的檢測(cè)驗(yàn)證，適用于氣管分泌物拭子、肺組織等多種常見樣本，滿足不同的檢測(cè)需求。

五、個(gè)性化定制服務(wù)

專業(yè)的研發(fā)團(tuán)隊(duì)可為您提供個(gè)性化的定制服務(wù)，根據(jù)您的特殊需求進(jìn)行產(chǎn)品優(yōu)化和調(diào)整，為您提供更貼合實(shí)際的檢測(cè)方案。

六、豐富的產(chǎn)品線

除了傳染性胸膜肺炎放線桿菌(APP)PCR檢測(cè)試劑盒，我們還提供Elisa試劑盒以及其它快檢試劑盒，滿足您在不同領(lǐng)域的檢測(cè)需求。

七、完善的售前售后服務(wù)

我們擁有完善專業(yè)的售前售后服務(wù)團(tuán)隊(duì)，在您購(gòu)買前為您提供詳細(xì)的產(chǎn)品咨詢和技術(shù)支持，購(gòu)買后為您解決使用過程中遇到的任何問題，讓您無(wú)后顧之憂。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

50T/盒，可滿足一定規(guī)模的檢測(cè)需求。

檢測(cè)方法

實(shí)時(shí)熒光PCR，具有快速、準(zhǔn)確、靈敏等優(yōu)點(diǎn)。

適用儀器

ABI 、安捷倫MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列熒光定量PCR檢測(cè)儀。

標(biāo)本采集

病死或撲殺豬，無(wú)菌采集肺病變部位或病變/非病變部位交界處的樣品；生豬滅菌棉拭子沾取氣管分泌物，放入無(wú)菌試管中。

保存和運(yùn)輸

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長(zhǎng)期保存可置-70℃，但不能超過6個(gè)月，標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用2~8℃冰袋運(yùn)輸，嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

使用方法：

1.樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1樣本前處理

組織樣品：每份組織分別從3個(gè)不同的位置稱取樣品約1g，手術(shù)-剪剪碎混勻后取0.5g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至1.5mL滅菌離心管中，8000rpm離心2min，取上清液100μL于1.5mL滅菌離心管中

1.2DNA提取

1)DNA的提取也可以采用上海烜雅生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA-提取試劑盒（離心柱提取法），請(qǐng)嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

2.試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù)，設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照；樣品每滿7份，多配制1份)，每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑APP反應(yīng)液酶液

用量（樣本數(shù)為N）20μL1μL

將混合好的測(cè)試反應(yīng)液分裝到PCR反應(yīng)管中，21uL/管。

3.加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟1提取的DNA、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取4μL，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

4.PCR擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）

4.1將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量PCR儀反應(yīng)槽內(nèi)；

4.2設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為25μL；

熒光通道選擇： 檢測(cè)通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI系列儀器請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光，選擇None即可。

4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

步驟循環(huán)數(shù)溫度時(shí)間收集熒光信號(hào)

11 cycle95℃10min否

240 cycles94℃15sec否

55℃30sec是

5.結(jié)果分析判定

5.1結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置Baseline和Threshold：一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析，當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時(shí)，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié)Baseline的start值(一般可在3~15范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop值(一般可在5~20范圍內(nèi)調(diào)節(jié))，以及Threshold的Value值(上下拖動(dòng)閾值線至高于陰性對(duì)照)，重新分析結(jié)果。

5.2結(jié)果判斷

陽(yáng)性：檢測(cè)通道Ct值≤35，且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線；

可疑：檢測(cè)通道35<Ct值≤38，建議重復(fù)檢測(cè)，如果檢測(cè)通道仍為35<Ct值≤38，且曲線有明顯的增長(zhǎng)曲線，判定為陽(yáng)性，否則為陰性；

陰性：樣本檢測(cè)結(jié)果Ct值>38或無(wú)Ct值。

6.質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品：Ct值>38或無(wú)Ct值；

陽(yáng)性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長(zhǎng)期，且Ct值≤32；

以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。

7.檢測(cè)方法的局限性

7.1樣本檢測(cè)結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān)；

7.2樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果；

7.3陽(yáng)性對(duì)照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏，會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果；

7.4病原體在流行過程中基因突變、重組，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

7.5不同的提取方法存在提取效率差異，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

7.6試劑運(yùn)輸，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果；

7.7本檢測(cè)結(jié)果僅供參考，如須確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測(cè)手段。

注意事項(xiàng)：

1.所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行；

2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化，完-全混勻并短暫離心；

3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存；

4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；

5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服；

6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行，以免交叉污染；

7.實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器；

8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。

9.本產(chǎn)品僅供科研。

選擇我們的傳染性胸膜肺炎放線桿菌(APP)PCR檢測(cè)試劑盒，就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測(cè)方案，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航！