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產(chǎn)品簡介：

流感是流感病毒(Influenza Virus)引起的嚴重危害公共衛(wèi)生和畜牧業(yè)發(fā)展的人畜共患傳染病。以前根據(jù)核蛋白的抗原性可將流感病毒分為 3 類:A 型、B 型和 C 型流感病毒(IAV、IBV、ICV)。近幾年來又發(fā)現(xiàn)了 D 型流感病毒(Influenza D virus, IDV)的存在。IDV 是正黏病毒科(Orthomyxoviridae),流感病毒屬的成員,主要侵害呼吸道。D 型流感是由 IDV 引起的接觸性病毒性傳染病,主要感染豬、牛等,其中牛是 IDV 的主要天然宿主。2011 年該病毒首-次在美國由 Ben Hause 從類似流感癥狀的豬體內(nèi)分離出,2013 年又在牛體內(nèi)分離出,通過反轉(zhuǎn)錄 PCR 和血清學(xué)檢測發(fā)現(xiàn) IDV 在美國牛群中廣泛傳播。近幾年來 IDV 有進一步蔓延發(fā)展的趨勢,法國、意大利、日本多個國家和地區(qū)檢測到該病毒,2014 年在中國山東牛群中也檢測到了該病毒的存在。IDV 的存在會使得動物機體抵抗力下降, 進而引起其他病,毒或細菌的感染,給養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大損失,因此,對 IDV 的預(yù)防非常重要。

本試劑盒適用于檢測拭子樣品、氣管、肺、腦、腸（包括內(nèi)容物）、肝、脾、腎、心等組織臟器中 D 型流感病毒 RNA，適用于 D 型流感病毒感染的診斷、檢疫、檢測、監(jiān)測和流行病學(xué)調(diào)查等。

產(chǎn)品特點：

一、嚴格的質(zhì)控體系

所有試劑盒從原料到成品都經(jīng)過嚴格的質(zhì)量控制，確保每一盒試劑盒都具有穩(wěn)定可靠的質(zhì)量，讓您的檢測結(jié)果更可信。

二、高靈敏度

產(chǎn)品經(jīng)過不斷優(yōu)化，具有出色的靈敏度，能夠檢測到極微量的D型流感病毒核酸，不放過任何潛在的感染風(fēng)險。

三、便捷操作

綜合各項指標特性，研發(fā)出操作便捷的試劑盒。從樣本制備到結(jié)果分析，每一步都有清晰的操作指南，即使是新手也能輕松上手。

四、多樣的檢測驗證樣本

該試劑盒經(jīng)過多種樣本的檢測驗證，適用于拭子樣品、氣管、肺、腦、腸（包括內(nèi)容物）、肝、脾、腎、心等多種常見樣本，滿足不同的檢測需求。

五、個性化定制服務(wù)

專業(yè)的研發(fā)團隊可為您提供個性化的定制服務(wù)，根據(jù)您的特殊需求進行產(chǎn)品優(yōu)化和調(diào)整，為您提供更貼合實際的檢測方案。

六、豐富的產(chǎn)品線

除了D型流感病毒(IDV)檢測試劑盒(熒光PCR法)，我們還提供Elisa試劑盒以及其它快檢試劑盒，滿足您在不同領(lǐng)域的檢測需求。

七、完善的售前售后服務(wù)

我們擁有完善專業(yè)的售前售后服務(wù)團隊，在您購買前為您提供詳細的產(chǎn)品咨詢和技術(shù)支持，購買后為您解決使用過程中遇到的任何問題，讓您無后顧之憂。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

50T/盒，可滿足一定規(guī)模的檢測需求。

檢測方法

實時熒光PCR，具有快速、準確、靈敏等優(yōu)點。

適用儀器

ABI7500、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

標本采集

拭子樣品：

拭子樣品：取鼻-拭子，將棉拭子深入鼻腔旋轉(zhuǎn),取鼻腔分泌液;將采樣后的拭子分別放入盛有 1.0 mL PBS 的

1.5 mL 離心管中,加蓋、編號。

病死畜采集肺臟或氣管分泌物等，用無菌攝子和剪刀采集肺臟等,裝入一次性塑料袋或其他滅菌容器,編號。

保存和運輸

采集或處理好的樣品在 2℃~8℃條件下保存應(yīng)不超過 24 h；若需長期保存，應(yīng)放置-70℃以下保存，凍融不超過 3 次。

使用方法：

1.樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1樣本前處理

拭子樣品：樣品在混合器上充分混合后,用高壓滅菌攝子將拭子中的液體擠出,棄去拭子,室溫靜置 30 min,4℃、

3 000 r/min 離心 15 min,取上清液轉(zhuǎn)入無菌的 1.5 mL 離心管中,編號備用；組織樣品：將所采組織病料置于潔凈、滅菌并烘干的研磨器中,按質(zhì)量體積比(1:1)加入樣品保存液進行充分研磨;4 ℃、3 000 r/min 離心 15 min,取上清液轉(zhuǎn)人無菌的 1.5 mL 離心管中,編號備用。

1.2核酸提取

推薦采用上海烜雅生物科技有限公司生產(chǎn)的核酸-提取或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進行核酸提取， 請按照試劑說明書進行操作。

2.試劑配制（試劑準備區(qū)）

根據(jù)待檢測樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照；反應(yīng)管數(shù)每滿 10 份，多配制 1 份)，每測試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑IDV 反應(yīng)液酶液

用量19μL1μL

將混合好的測試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中，20μL/管。

3.加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的核酸、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 5μL，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻， 短暫離心。

4.PCR 擴增（核酸擴增區(qū)）

4.1將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)；

4.2設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL；熒光通道選擇：檢測通道（ReporterDye）FAM，淬滅通道

（QuencherDye）NONE，ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光，選擇 None 即可。

4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

步驟循環(huán)數(shù)溫度時間收集熒光信號

11 cycle50℃10min否

21 cycle95℃2min否

345 cycles95℃15sec否

60℃30sec是

5.結(jié)果分析判定

5.1結(jié)果分析條件設(shè)定（請參照各儀器使用說明書進行設(shè)置，以分析 ABI7500 儀器為例）

反應(yīng)結(jié)束后自動保存結(jié)果，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 Start 值、End 值以及 Threshold 值（用戶可根據(jù)實際情況自行調(diào)整，Start 值可設(shè)在 3～15、End 值可設(shè)在 5～20，使閾值線位于擴增曲線指數(shù)期，陰性質(zhì)控品的擴增曲線平直或低于閾值線），點擊 Analyze 自動獲得分析結(jié)果。

5.2結(jié)果判斷

陽性：檢測通道 Ct 值≤40，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線； 陰性：樣本檢測結(jié)果 Ct 值>40 或無 Ct 值。

5.3質(zhì)控標準

陰性質(zhì)控品：無特異性擴增曲線或無 Ct 值顯示；

陽性質(zhì)控品：擴增曲線有明顯指數(shù)增長期，且 Ct 值≤32； 以上條件應(yīng)同時滿足，否則實驗視為無效。

6.檢測方法的局限性

1.樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運送以及保存質(zhì)量有關(guān)；

2.樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現(xiàn)假陽性結(jié)果；

3.陽性對照、擴增產(chǎn)物泄漏，會導(dǎo)致假陽性結(jié)果；

4.病原體在流行過程中基因突變、重組，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

5.不同的提取方法存在提取效率差異，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

6.試劑運輸，保存不當(dāng)或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準確的結(jié)果；

7.本檢測結(jié)果僅供參考，如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。

注意事項：

1.所有操作嚴格按照說明書進行；

2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化，完-全混勻并短暫離心；

3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存；

4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；

5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服；

6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行，以免交叉污染；

7.實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；

8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通則》進行處理。

9.本產(chǎn)品僅供科研。

選擇我們的D型流感病毒(IDV)檢測試劑盒(熒光PCR法)，就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！