諾博萊德 CTAB植物基因組DNA快速提取試劑盒（離心柱型）

CTAB植物基因組DNA快速ti取試劑盒 核酸提取

目錄號：40114

適用范圍：

適用于快速提取植物基因組DNA

試劑盒組成、儲存、穩(wěn)定性：

本試劑盒在室溫儲存 12 個月不影響使用效果。

儲存事項:

1. 裂解液 PL、結(jié)合液 PQ 或者抑制物去除液 IR 低溫時可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以在 55℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。

2.避免試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH 值變化，各溶液使用后應(yīng)及時蓋緊蓋子。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

產(chǎn)品介紹：

改進的經(jīng)典 CTAB 植物 DNA 抽提液內(nèi)（添加多種針對植物特點的多糖、多fen去除成份）迅速裂解細胞和滅活細胞內(nèi)核酸mei，lv仿抽提后通過離心清除多糖、多酚和蛋白質(zhì)（根據(jù)需要，上清中還加入異丙chun離心沉淀基因組 DNA，進一步去除其它各種雜質(zhì)），然后基因組 DNA 在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜，再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟， 進一步將多糖、多fen和細胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除，zui后低鹽的洗脫緩沖液將純凈基因組 DNA 從硅基質(zhì)膜上洗脫。

產(chǎn)品特點：

 1.離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進口特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復(fù)性好?？朔藝a(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。

 2.不需要使用有毒的苯fen等試劑，也不需要乙chun沉淀等步驟?？焖?，簡捷，單個樣品操作一般可在 1 小時內(nèi)完成。

 3.數(shù)種去多糖、多fen成份和多次柱漂洗確保高純度，OD260/OD280 典型的比值達

 4.1.7～1.9，長度可達 30 kb -50kb，可直接用于 PCR，Southern-blot 和各種mei切反應(yīng)

注意事項：

 1.所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉(zhuǎn)速可以達到13,000rpm的傳統(tǒng)臺式離心機，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機。

 2.開始實驗前將需要的水浴先預(yù)熱到65℃?zhèn)溆谩?/span>

 3.需要自備lv仿/異戊chun（體積比24：1混合）、無水乙chun和β-巰基乙chun。

 4.結(jié)合液PQ 和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套，避免沾染皮膚、眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。

 5.不同來源的植物組織材料中提取DNA 的量會有差異，一般100mg新鮮組織典型產(chǎn)量可達3-25μg。洗脫液EB不含有螯合劑EDTA， 不影響下游mei切、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫， 但應(yīng)該確保pH大于7.5， pH過低影響洗脫效率。用水洗脫DNA應(yīng)該保存在－20℃。DNA如果需要長期保存，可以用TE緩沖液洗脫 （10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影響下游mei切反應(yīng)，使用時可以適當稀釋。        

 標準操作步驟：（實驗前請先閱讀注意事項）提示：

  第一次使用前請先在漂洗液 WB 和結(jié)合液 PQ 中加入zhi定量的無水乙chun，充分混勻，加入后請及時在方框打鉤標記已加入乙chun，以免多次加入!

 取所需適量裂解液 PL 放置在 65℃預(yù)熱，使用前加入 β-巰基乙chun到終濃度 2%。

 1.取適量植物組織（新鮮組織 100 mg 或干重組織 30 mg）在研缽中加入液氮充分碾磨成細粉。

 2.轉(zhuǎn)移細粉到一個 1.5ml 離心管，不要解凍，加 600μl 65℃預(yù)熱的裂解液 PL (確認已加入 β-巰基乙chun至 2%)，劇烈渦旋振蕩混勻，用大口徑槍頭輕柔吹打幫助裂解。

（如果組織裂解困難，可根據(jù)需要加一個輕柔勻漿 10 秒的步驟幫助裂解。）

 3.65℃水浴 20-60 分鐘，在水浴過程中顛倒離心管以混合樣品數(shù)次。

（可選:如果組織干燥或者產(chǎn)量低，可以適當延長水浴時間。如果 RNA 殘留多，可在水浴前加入 6μl RNA mei（20mg/ml）。）

 4.加入 700μl lv仿/異戊chun（體積比 24：1 混合），顛倒充分混勻幾分鐘（或者渦旋混勻），13,000rpm 離心 5 分鐘。

（若提取的植物組織富含多糖多fen，可以在第4步前用等體積fen/lv仿（1：1）抽提一遍。）

 5.小心吸取上清到一個新的1.5ml離心管，注意不要吸到界面物質(zhì)。

（如上清比較渾濁，則需要重復(fù)步驟4一遍，直到得到透亮上清。）

 6.較精確估算上清量，加入1.5 倍體積結(jié)合液PQ（請先檢查是否已加入無水乙chun!）后立刻渦旋，充分混勻。此時可能出現(xiàn)沉淀，但不影響實驗結(jié)果。

 7.將上一步所得混合物（包括可能出現(xiàn)的沉淀）加入一個DNA吸附柱中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm離心30秒，倒掉收集管中的廢液（先加700μl離心，棄廢液，再加入剩余的溶液，再次離心）。

 8.加入500μl 抑制物去除液IR，12,000rpm 離心30秒，棄廢液。

 9.加入700μl漂洗液WB（請先檢查是否已加入無水乙chun!），12,000rpm離心30秒，棄掉廢液。

 10.加入 500μl 漂洗液 WB，12,000rpm 離心 30 秒，棄掉廢液。

 11.將 DNA 吸附柱放回空收集管中，13,000rpm 離心 2 分鐘，盡量除去漂洗液， 以免漂洗液中殘留乙chun抑制下游反應(yīng)。

 12.取出 DNA 吸附柱，放入一個干凈的離心管中，在吸附膜的中央加100μl 洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在 65-70℃水浴中預(yù)熱），室溫放置 3-5 分鐘，12,000rpm離心1分鐘。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，室溫放置2分鐘，12,000rpm離心 1 分鐘。

（洗脫體積越大，洗脫效率越高，如果預(yù)計和需要產(chǎn)量高，可增大洗脫體積，如果需要 DNA 濃度較高，可以適當減少洗脫體積，但是zui小體積不應(yīng)少于 50μl，體積過小降低 DNA 洗脫效率，減少DNA產(chǎn)量。）

 13.DNA可以存放在 2-8℃，如果要長時間存放，可以放置在－20℃。

附錄（低DNA含量或者產(chǎn)量低樣品操作步驟）：

 1.取適量植物組織（新鮮組織 400 mg 或干重組織 200 mg）在研缽中加入液氮充分碾磨成細粉。

 2.轉(zhuǎn)移細粉到一個 15ml 離心管，不要解凍，加入 9ml 65℃預(yù)熱的裂解液 PL (確認已經(jīng)加入 β-巰基乙chun至 2%)，劇烈渦旋振蕩混勻，用大口徑槍頭吹打幫助裂解。

（如果組織裂解困難，可根據(jù)需要加一個輕柔勻漿 10 秒的步驟幫助裂解。）

 3.室溫放置 60 分鐘，中間不時顛倒離心管以混合樣品數(shù)次。

（如果組織干燥或者產(chǎn)量低，可以放置在 65℃水浴。）

 4.加 4.5ml lv仿/異戊chun（體積比 24：1 混合），渦旋充分混勻，3,000g 離心 10 分鐘。

 5.小心吸取上清到一個新的 15ml 離心管，注意不要吸到界面物質(zhì)。重復(fù)一遍步驟 4。

 6.小心吸取上清到一個新的 15ml 離心管，估算上清量，加入 0.7 倍體積的異丙chun，渦旋混勻來沉淀

CTAB植物基因組DNA快速ti取試劑盒 核酸提取