諾博萊德 植物細(xì)胞核提取試劑盒-酶法

植物細(xì)胞核提取試劑盒-酶法 蛋白提取

產(chǎn)品貨號(hào)：P5123

產(chǎn)品名稱：植物細(xì)胞核提取試劑盒-酶法

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

中文名稱：植物細(xì)胞核提取試劑盒-酶法

規(guī)格：100T ; 50T

儲(chǔ)存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P5123 植物細(xì)胞核提取試劑盒-酶法

適用樣本：植物

注：

1. 試劑盒2-8℃保存，開蓋后組份按要求條件保存。

2. 一個(gè)月以上長(zhǎng)期不用-20℃保存。避免反復(fù)凍融。多次凍融會(huì)導(dǎo)致失效。

3. 需要長(zhǎng)期保存時(shí)可以根據(jù)使用情況進(jìn)行小量分裝后-20℃保存。

4. 試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

植物細(xì)胞核提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種植物細(xì)胞和各種實(shí)體植物組織，如葉片、根、種子等植物組織中提取細(xì)胞核。提取過程簡(jiǎn)單方便。制備的核不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。

本試劑盒提取得到的細(xì)胞核可以直接用于蛋白提取等下游應(yīng)用。

本試劑盒采用酶法提取，酶法提取制備的植物核，回收率提高，純度高，保持天然活性，但是耗時(shí)較長(zhǎng)。非酶法的提取試劑盒提取過程簡(jiǎn)單方便，速度快，可在1 小時(shí)內(nèi)完成，而且絕少交叉污染，但是回收率相比酶法較低。如果需要更加快捷的提取試劑盒，可以選擇非酶法的提取試劑盒，對(duì)提取速度沒有要求的話，可以選擇酶法提取試劑盒。請(qǐng)根據(jù)實(shí)際需要選擇試劑盒。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1. 使用方便。

2. 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

3. 紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。

4. 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含5 種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑 Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

自備試劑和儀器：

離心機(jī)、振蕩器、渦旋混勻器、勻漿器/勻漿機(jī)、移液器、冰箱、冰盒，PBS緩沖液、離心管、吸頭、細(xì)胞篩（100um）、一次性手套

使用方法：

一、使用注意事項(xiàng)：

1、旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。

2、實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過程須保持樣品處于低溫。

3、可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑。

二、操作步驟：

1、取洗凈擦干后并去除葉梗和粗脈的200-400mg植物組織樣本用手術(shù)qian刀盡可能剪碎，加1-2ml

PBS后用勻漿機(jī)充分勻漿或者加適量PBS后用勻漿機(jī)/勻漿器充分勻漿。

2、將勻漿液用100μm細(xì)胞篩過濾。

【注】：

①?zèng)]有細(xì)胞篩的話，在4℃，稍微靜置，讓粗纖維，成團(tuán)組織塊等沉降，或者以低于100×g條件下離心1分鐘，收集上部液體，棄組織沉淀。

②含黏液較多的樣品可能難以吸取，可以將1ml吸頭尖稍微剪掉一點(diǎn)使用。

3、在濾液在2000×g條件下離心5-10分鐘，收集沉淀。

4、在沉淀中加入500μl提取液A，充分混勻。

【注】：

①培養(yǎng)細(xì)胞 1000×g條件下離心5分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)胞后用PBS洗滌2次，然后直接加入提取液A 重懸。

②大約每300μl細(xì)胞壓積中加入1ml提取液A。

③一般加入樣本體積的2-3倍體積的提取液A，充分淹沒樣本即可。

5、將細(xì)胞懸液置振蕩器上37℃或室溫振蕩12-72小時(shí)。

【注】：

①使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動(dòng)即可。沒有振蕩條件也可以不振蕩，中間每隔幾小時(shí)用移液器吹打混勻即可。

②不同類型的植物樣本需要處理的時(shí)間差異較大。擬南芥較易處理，鮮嫩葉片較易處理，年齡小的樣本處理時(shí)間短。擬南芥嫩葉最短4小時(shí)即可。

③部分細(xì)胞壁較厚的植物類型可能需要處理更長(zhǎng)時(shí)間?？梢匝娱L(zhǎng)至72小時(shí)以上處理以提高核得率。

6、在2000×g條件下離心10分鐘，棄上清，收集沉淀。

7、在沉淀中加入500μl-1ml提取液B，用勻漿器充分勻漿，在勻漿液中補(bǔ)充提取液B至1ml，充分混勻。

8、置振蕩器振蕩5-10分鐘。

【注】：

①使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動(dòng)即可。

②沒有振蕩條件也可以不振蕩，置4℃靜置，稍微延長(zhǎng)處理時(shí)間，中間每隔幾小時(shí)用移液器吹打混勻即可。

9、在2000×g條件下離心10分鐘，棄上清，收集沉淀，即為細(xì)胞核。

10、用細(xì)胞核保存液C或者其它相應(yīng)的緩沖液重懸細(xì)胞核，置冰箱備用或直接用于下游實(shí)驗(yàn)。

【注】：

①可以不用試劑C。

②根據(jù)下游實(shí)驗(yàn)需要選擇重懸液。

③保存液中的細(xì)胞核可以2000×g條件下離心10分鐘重新回收。

注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得優(yōu)良實(shí)驗(yàn)效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時(shí)試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

植物細(xì)胞核提取試劑盒-酶法 蛋白提取

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