諾博萊德 細(xì)胞上清外泌體提取試劑盒

細(xì)胞上清外泌體提取試劑盒 常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號(hào)：P5098

產(chǎn)品名稱：細(xì)胞上清外泌體提取試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：20T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

中文名稱：細(xì)胞上清外泌體提取試劑盒

規(guī)格：20T

儲(chǔ)存條件：室溫保存，有效期2年，使用前請(qǐng)充分混勻。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P5098 細(xì)胞上清外泌體提取試劑盒

適用于細(xì)胞上清，可以提取400ml 細(xì)胞上清液

產(chǎn)品介紹

外泌體是由細(xì)胞分泌的包含 RNA 和蛋白質(zhì)的小囊泡（30-150 nm），在血液、唾液、尿液及乳汁等體液中大量存在。外泌體被認(rèn)為具有細(xì)胞間信使的功能，在特定細(xì)胞之間傳遞它們的效應(yīng)物或信號(hào)分子；然而其構(gòu)造、效應(yīng)物組成以及所參與的生物學(xué)通路目前尚不明晰。

外泌體的生物學(xué)功能研究中需要分離完整的外泌體顆粒，而傳統(tǒng)超速離心方法步驟繁瑣、硬件要求高、操作難度大。生物自主開(kāi)發(fā)的外泌體快速提取試劑盒，組分經(jīng)過(guò)優(yōu)化處理，適用于細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的外泌體提取，并搭配純化過(guò)濾裝置，可快速高效地獲得高純度外泌體顆粒，可用于電鏡分析、NTA 粒徑分析、核酸分析、蛋白分析、細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)等。

注：*無(wú) RNA/DNA 酶，無(wú)菌。

自備材料：

高速離心機(jī)（可達(dá)到 10000×g 離心力）；渦旋振蕩器；2mL 離心轉(zhuǎn)子；1.5mL 離心管；1×PBS緩沖液（無(wú)菌）。

操作步驟：

1. 樣品預(yù)處理

(1) 取樣：如果是凍存樣品，從冰箱取出后于 25℃水浴中進(jìn)行解凍，將wan全融化后的樣品置于冰上；如果是新鮮樣品，收集樣品后置于冰上。

(2) 樣品初始用量：?jiǎn)未翁崛r(shí)的細(xì)胞培養(yǎng)上清液的用量最少為 20mL。

(3) 離心去細(xì)胞碎片：將樣品轉(zhuǎn)移至離心管中，于 4℃以 3000×g（~5200rmp）離心 10min，去除樣品中的細(xì)胞碎片

（注：若沉淀較多，可 3000×g/10min 離心多次至無(wú)明顯沉淀，每次取離心上清液）。

(4) 上清液轉(zhuǎn)移：去除細(xì)胞碎片的離心上清液轉(zhuǎn)移到新的 50mL 離心管中。

2. 提取外泌體

(1) 上清液預(yù)處理：在去除雜質(zhì)的離心上清液中加入 Exosome Concentration Solution（ECS 試劑），具體的加入劑量如下：（其他劑量請(qǐng)根據(jù)表中的試劑用量等比例換算）。

(2) 溶液混合：加入 ECS 試劑后將離心管蓋緊，通過(guò)渦旋振蕩器混勻 1min，再放置于 4℃靜置至少 2h（增加靜置時(shí)間可提高外泌體得率，但靜置時(shí)間不可超過(guò) 24h）。

(3) 沉淀外泌體：取出裝有混合液的離心管于 4℃以 10000×g（~9500rmp）離心 60min，棄上清，沉淀中富含外泌體顆粒（注：盡可能吸凈上清液）。

(4) 外泌體重懸：取 1×PBS 均勻吹打離心沉淀物（具體加入劑量如下表），待其溶解后，將重懸液轉(zhuǎn)移至新的 1.5mL 離心管中（注：其他劑量請(qǐng)根據(jù)表中的試劑用量等比例換算）。

(5) 收集外泌體顆粒：將含有重懸液的 1.5mL 離心管于 4℃以 12000×g（~12400rmp）離心 2min，保留上清液，該上清液中富含外泌體顆粒（注：若沉淀較多，可 12000×g /2min 離心多次至無(wú)明顯沉淀，每次取離心上清液）。

3. 純化外泌體

(1) 純化外泌體：將收獲的外泌體顆粒粗品轉(zhuǎn)入 Exosome Purification Filter（EPF 柱）上室中，于 4℃以 3000×g（~6200rmp）離心 10min，離心后收集 EPF 柱管底的液體，此液體即為純化后的外泌體顆粒（注：EPF 柱不可重復(fù)使用）。

(2) 外泌體的保存：純化后的外泌體以 50-100μL 進(jìn)行分裝保存于-80℃低溫冰箱中，以備后繼實(shí)驗(yàn)使用。

注意事項(xiàng)：

本產(chǎn)品僅用于生命科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷及其他用途。

細(xì)胞上清外泌體提取試劑盒 常備現(xiàn)貨

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