諾博萊德 植物核蛋白/胞質(zhì)蛋白提取試劑盒（非酶法）

植物核蛋白/胞質(zhì)蛋白提取試劑盒 常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號(hào)：P5044

產(chǎn)品名稱：植物核蛋白/胞質(zhì)蛋白提取試劑盒（非酶法）

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

中文名稱：植物核蛋白/胞質(zhì)蛋白提取試劑盒（非酶法）

規(guī)格：100T ; 50T

儲(chǔ)存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P5044 植物核蛋白/胞質(zhì)蛋白提取試劑盒（非酶法）

植物核蛋白和細(xì)胞質(zhì)蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種植物細(xì)胞和各種實(shí)體植物組織，如葉片、根、種子等植物組織中提取核蛋白和其它細(xì)胞質(zhì)蛋白。提取過程簡(jiǎn)單方便，可在1小時(shí)內(nèi)完成。制備的核蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解植物核組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于WesternBlotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gelshift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

適用樣本：植物

注：

1. 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

3. 試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

植物核蛋白和細(xì)胞質(zhì)蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種植物細(xì)胞和各種實(shí)體植物組織，如葉片、根、種子等植物組織中提取核蛋白和其它細(xì)胞質(zhì)蛋白。提取過程簡(jiǎn)單方便，可在 1 小時(shí)內(nèi)完成。制備的核蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解植物核組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有 EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于 2D 電泳，如下游實(shí)驗(yàn)需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，請(qǐng)使用其他貨號(hào)的試劑盒。也可以將最后樣品除鹽后再用于 2D 電泳，用脫鹽柱脫鹽處理。

本試劑盒采用非酶法提取，提取過程簡(jiǎn)單方便，速度快，可在 1 小時(shí)內(nèi)完成，而且絕少交叉污染，但是蛋白回收率相比酶法較低。酶法提取制備的蛋白，回收率稍有提高，蛋白純度高，保持天然活性，但是耗時(shí)較長(zhǎng)。如果需要更加快捷的提取試劑盒，可以選擇非酶法的提取試劑盒，對(duì)提取速度沒有要求的話，可以選擇酶法提取試劑盒。請(qǐng)根據(jù)實(shí)際需要選擇試劑盒。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.    使用方便。

2. 將蛋白提取的時(shí)間縮短至 1 小時(shí)。

3. 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

4. 紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。

5. 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含 6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑 AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

自備試劑和儀器：

離心機(jī)、振蕩器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS 緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心

管、吸頭、一次性手套、100 μm 細(xì)胞篩。

使用方法：

一、使用注意事項(xiàng)：

1. 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。

2. 實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過程須保持樣品處于低溫。

3. 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

4. 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

5. 離心機(jī)轉(zhuǎn)速有相對(duì)離心力（RCF，×g）和每分鐘轉(zhuǎn)速（RPM）兩種表示方式，有些離心機(jī)設(shè)置有RPM和×g顯示切換，但部分離心機(jī)沒有自動(dòng)切換功能。需要用下面的公式進(jìn)行換算： g=r×1.118×10-^5×rpm² （r為有效離心半徑，即從離心機(jī)軸心到離心收集管底部中心位置的長(zhǎng)度，單位為厘米)例如 : 轉(zhuǎn)速 為 3000rpm， 有效 離心 半徑為 10cm，則 相對(duì) 離心力 （ RCF， ×g ）為=10×1.118×10^-5×3000²=1006.2（×g）。

二、操作步驟：

1. 提取液準(zhǔn)備：

每 500μl 冷的蛋白提取液 A 中加入 1μl 蛋白酶抑制劑；每 200μl 蛋白提取液 B 中分別加入 1μl 蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

【注】：

1) 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

2) 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

2. 取200-500 mg新鮮植物葉片樣本，用PBS或純水洗凈擦干后去除葉梗和粗脈，用手術(shù)jian刀盡可能剪碎。

3. 加入500-1000μl提取液A后用勻漿機(jī)充分勻漿或勻漿器充分勻漿。

【注】：

1)    勻漿盡可能充分。至無明顯可見固體。

2) 培養(yǎng)細(xì)胞直接收集細(xì)胞后用勻漿器勻漿即可，勻漿后加提取液A 混勻后直接進(jìn)行以下步驟離心。

3) 處理葉片等組織樣本如果沒有勻漿機(jī)，也可先加少量提取液A 后用勻漿器充分勻漿后再加提取液A混勻。

4. 將勻漿用100um細(xì)胞篩過濾。

【注】：

1) 沒有細(xì)胞篩時(shí)可以不過濾，將勻漿液靜置 1 分鐘，待大的沒有破碎的組織塊自然沉降，吸取上清。

2) 部分黏液較多的植物樣本可能難以吸取，可以將1ml 吸頭的口剪掉一點(diǎn)再吸。

5. 將濾液在4℃，800×g條件下離心5分鐘。

6. 收集沉淀（I），將上清（I）移入另一干凈的離心管。

7. 在沉淀（I）中加入100-200μl冷的提取液B，高速渦旋5秒，充分混勻。

8. 置4℃振蕩20-40分鐘。

【注】：

1) 用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，保持液體稍微有晃動(dòng)即可。

2) 沒有低溫振蕩條件可以不振蕩，在2-8℃靜置，稍微延長(zhǎng)處理時(shí)間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。

9. 在4℃，12000×g 條件下離心10分鐘。

10. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即得到核蛋白。

11. 在步驟6中的上清（I）中加入50μl胞質(zhì)提取液C，高速渦旋振蕩10秒，充分混勻。

12. 置4℃振蕩5分鐘。

13. 在4℃，12000×g條件下離心5分鐘。

14. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即得到細(xì)胞質(zhì)蛋白。

15. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

【注】：

1) 建議用BCA法進(jìn)行蛋白定量。

2) 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。

注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得優(yōu)良實(shí)驗(yàn)效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時(shí)試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

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