諾博萊德 細(xì)胞跨膜蛋白提取試劑盒

細(xì)胞跨膜蛋白提取試劑盒 常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號(hào)：P4944

產(chǎn)品名稱：細(xì)胞跨膜蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡介：

中文名稱：細(xì)胞跨膜蛋白提取試劑盒

規(guī)格：50T ; 100T

儲(chǔ)存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P4944 細(xì)胞跨膜蛋白提取試劑盒

動(dòng)物跨膜蛋白承擔(dān)各種生物功能，在疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中扮演重要角色?？缒さ鞍讟悠返闹苽湫枰浞挚紤]到與下游的膠分析及質(zhì)譜分析等應(yīng)用配套，因此跨膜蛋白樣本制備成為一個(gè)難以逾越的挑戰(zhàn)。細(xì)胞跨膜蛋白提取試劑盒是一種高效的高產(chǎn)跨膜蛋白提取試劑盒。本試劑盒提供全套試劑，適用于從動(dòng)物細(xì)胞和組織溫和、高效地抽提膜/跨膜蛋白和膜蛋白復(fù)合物。用本試劑盒抽提和富集到的蛋白包括從分子量很小到很大的蛋白，單次跨膜至7次以上的蛋白，甚至一些大的蛋白復(fù)合物。提取過程簡單方便。提取的膜蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。本試劑盒提取的蛋白可用于WesternBlotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gelshift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。

適用樣本：動(dòng)物細(xì)胞

注：

1. 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

3. 試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

產(chǎn)品簡介：

動(dòng)物跨膜蛋白承擔(dān)各種生物功能，在疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中扮演重要角色?？缒さ鞍讟悠返闹苽湫枰浞挚紤]到與下游的膠分析及質(zhì)譜分析等應(yīng)用配套，因此跨膜蛋白樣本制備成為一個(gè)難以逾越的挑戰(zhàn)。

細(xì)胞跨膜蛋白提取試劑盒是一種高效的高產(chǎn)跨膜蛋白提取試劑盒。本試劑盒提供全套試劑，適用于從動(dòng)物細(xì)胞和組織溫和、高效地抽提膜/跨膜蛋白和膜蛋白復(fù)合物。用本試劑盒抽提和富集到的蛋白包括從分子量很小到很大的蛋白，單次跨膜至7次以上的蛋白，甚至一些大的蛋白復(fù)合物。提取過程簡單方便。提取的膜蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。

本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。

自備試劑和儀器：

離心機(jī)、振蕩器、勻漿機(jī)/勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1、使用方便，從細(xì)胞，組織中提取蛋白不需經(jīng)過研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。

2、提取過程簡單方便。

3、含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

4、紫外檢測蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。

5、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含 6 種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法：

一、使用注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得優(yōu)良實(shí)驗(yàn)效果

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時(shí)試劑損失。

3. 實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過程須保持樣品處于低溫。

4. 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

5. 如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

6. 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

7. 下游實(shí)驗(yàn)如果是進(jìn)行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時(shí)間。

8. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

9. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

二、細(xì)胞跨膜蛋白提取

1. 提取液制備：

每 500ul 冷的蛋白提取液 A 中加入 2ul 蛋白酶抑制劑混合物和 2ul 磷酸酶抑制劑，混勻后置冰上備用。

每 500ul 膜蛋白溶解液 C 中加入 2ul 蛋白酶抑制劑混合物和 2ul 磷酸酶抑制劑，混勻后置冰上備用。

2．收集 5-10×10

6個(gè)以上細(xì)胞，在 4℃，500×g 條件下離心 2-3 分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干。

3. 用冷 PBS 洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

4. 細(xì)胞樣品中加入 200μl 冷的試劑 A，高速渦旋振蕩 5 秒，置 2-8℃振蕩 20 分鐘-1 小時(shí)。

5. 再次高速渦旋振蕩 5 秒，然后在 4℃，13000×g 條件下離心 5 分鐘。

6. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，37℃水浴 10 分鐘. 7. 在 37℃條件 500-2000×g 離心 3 分鐘，此時(shí)溶液分為兩層，下層是跨膜蛋白約為 20-40μl。

8. 小心移除上層。下層粘稠狀液體即為跨膜蛋白樣品。

9. 用 150-200μl 冰冷的試劑 B 稀釋下層跨膜蛋白，混勻后冰浴 2 分鐘，37℃水浴 10 分鐘，37℃條件下 2000×g 離心 3 分鐘，此時(shí)溶液分為兩層，下層是跨膜蛋白部分約為 20-40μl。

10. 按步驟 7 再次抽提下層(此步驟可以選做)。

11. 小心移除上層。用 50-200μl 冰冷的試劑 C 溶解下層，即得跨膜蛋白。

12. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

三、組織跨膜蛋白提取

1. 提取液制備：

每 500ul 冷的蛋白提取液 A 中加入 2ul 蛋白酶抑制劑混合物和 2ul 磷酸酶抑制劑，混勻后置冰上備用。

每 500ul 膜蛋白溶解液 C 中加入 2ul 蛋白酶抑制劑混合物和 2ul 磷酸酶抑制劑，混勻后置冰上備用。

2. 取 50-100 mg 組織樣本用手術(shù)jian刀盡可能剪碎，加入冷的蛋白提取液 A，用組織勻漿機(jī)/勻漿器勻漿至無明顯肉眼可見固體，將勻漿吸入另一預(yù)冷的干凈離心管。

3. 按照細(xì)胞蛋白的提取方法的第 3 步驟往下操作即可。

常見問題分析：

1.蛋白濃度低？

膜蛋白豐度比較低，在條件允許的情況下，需要盡可能加大細(xì)胞的上樣量以提高膜蛋白濃度。

處理部分組織樣本時(shí)可能沒有裂解wan全，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長試劑A的處理時(shí)間即可。

最好在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

2.用什么方法定量蛋白？

建議用BCA法。不適合用Bradford 法，因?yàn)樵噭〢中含有干擾Bradford法的組份，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。

如果已經(jīng)進(jìn)行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

3.提取的蛋白具有活性嗎？

本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒有對(duì)蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。

4.膜蛋白電泳沒有條帶？

膜蛋白樣品通常濃度較低，電泳前一定要進(jìn)行蛋白定量，以保證電泳是蛋白上樣量足夠。

膜蛋白提取好后，用溶解液充分溶解后，可以超聲處理一下，再進(jìn)行蛋白定量。

蛋白加Loading buffer后可以不用煮沸，采用50℃保溫30分鐘。

蛋白Loading buffer中SDS終濃度含量可以提高至3%-10%。

有些樣品的膜蛋白含量太低，可以使用丙酮沉淀膜蛋白，再使膜蛋白溶解于上樣緩沖液中，一般可以跑出清晰的蛋白條帶。

電泳時(shí)最好采用低電壓低電流電泳。

注意事項(xiàng)：

1. 本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。

2. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

3. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

4. 避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

5. 如果試劑不小心接觸皮膚或眼睛，應(yīng)立即用水沖洗。

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