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上海語純生物科技有限公司
初級會員·1年BH0029AsPC-1/GEM人轉(zhuǎn)移胰腺腺癌細胞耐吉西他濱
| 參考價: | 面議 |
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)- BH0029 產(chǎn)品型號
- 語純生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù)：39更新時間：2025-04-25 13:36:18
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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 1×10^6 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | BH0029 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥 |
產(chǎn)品貨號：BH0029
產(chǎn)品規(guī)格：1×10^6
本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或進一步生產(chǎn)使用，不可用于臨床診斷或治療。
產(chǎn)品介紹
AsPC-1/GEM人轉(zhuǎn)移胰腺腺癌細胞耐吉西他濱（STR鑒定）
細胞描述
一個胰腺癌病人的腹水中的細胞移植到裸鼠后建立了這個細胞株.
細胞特性
1） 來源：胰腺；轉(zhuǎn)移灶；腹水腺癌
2） 形態(tài)：上皮細胞樣，貼壁生長
3） 含量：>1x106 細胞數(shù)
4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
5） 用途：僅供科研使用
細胞誘導(dǎo)構(gòu)建實驗步驟
1. MTT法檢測ASPC-1對吉西他濱的IC50
將處于對數(shù)生長期的ASPC-1細胞傳代后，以6000/孔的密度接種在96孔板里，待細胞生長穩(wěn)定后，將培養(yǎng)基更換為含不同濃度吉西他濱的專用培養(yǎng)基，濃度依次為0.03μg/mL、0.3μg/mL、1.5μg/mL、3μg/mL、6μg/mL、12μg/mL、18μg/mL。置于含5%CO2、飽和濕度的37℃恒溫細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h。取出96孔板，每孔加入20ul MTT（5 mg/mL）溶液加入到每個培養(yǎng)孔中，繼續(xù)培養(yǎng)4 h。4 h后，取出96孔板，吸除培養(yǎng)基，排槍每孔加入150 µL Formazan溶液，置搖床上低速振蕩10-30min，使結(jié)晶物充分溶解。使用酶標(biāo)儀在OD 570nm處測量各孔的吸光值，分析實驗結(jié)果，得出IC50為0.8μg/mL，則選擇此濃度作為ASPC-1耐藥株誘導(dǎo)的起始濃度。
2. ASPC-1細胞耐藥分步誘導(dǎo)
取處于對數(shù)生長期的ASPC-1細胞，加入含0.8μg/mL吉西他濱的專用培養(yǎng)基，置于含5%CO2、飽和濕度的37℃恒溫細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。隔日換液（同濃度含藥培養(yǎng)基），待細胞可以穩(wěn)定生長后加大藥物濃度，每次增加2倍，直至10個月后，細胞可以在含18μg/mL吉西他濱的專用培養(yǎng)基保持穩(wěn)定生長4day，視為細胞耐藥成功，并命名為ASPC-1/GEM。
細胞接收后的處理：
1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的專用培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的專用培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。 收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備DMEM 培養(yǎng)基，優(yōu)質(zhì)胎牛血清15%，GlutaMAX-1谷氨酰胺1%，P/S 1%（可在專用培養(yǎng)基中加入最大耐藥濃度18ug/ml的GEM)
2） 細胞在剛復(fù)蘇時較為脆弱，未貼壁期間和貼壁前期需用不含GEM的專用培養(yǎng)基，待細胞生長狀態(tài)穩(wěn)定時再根據(jù)需要濃度添加 GEM。（第一次不要直接加到最大耐藥濃度），傳代時中止液須為不含GEM的專用培養(yǎng)基。
3）若細胞生長狀態(tài)較為緩慢時，可適當(dāng)降低GEM的濃度，或使用不含GEM的專用培養(yǎng)基培養(yǎng)至細胞生長狀態(tài)較好時，再更換為所需的GEM濃度。
4）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
5）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
細胞處理：
1） 凍存細胞的復(fù)蘇：：
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL專用培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，專用培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml專用培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的專用培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例；
1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.
2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
注意事項：
1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
2. 建議在復(fù)蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。
AsPC-1/GEM人轉(zhuǎn)移胰腺腺癌細胞耐吉西他濱（STR鑒定）
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