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LLC+GFP 小鼠肺癌細胞綠色熒光標(biāo)記

細胞描述

Lewis肺癌是一種從C57BL小鼠的肺中建立的細胞系，該細胞帶有原發(fā)性Lewis肺癌的植入所致的腫瘤，被廣泛用作轉(zhuǎn)移的模型，可用于研究癌癥化學(xué)治療劑的機制。

該細胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶GFP基因。

細胞特性

1） 來源：小鼠肺癌組織

2）形態(tài)：半貼壁生長，混合形態(tài)，有上皮細胞樣，松散貼壁或懸浮有梭形、圓形等細胞形態(tài) 。

3）含量：>1x106  細胞數(shù)

4）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5）用途：僅供科研使用。

細胞篩選

該細胞為已經(jīng)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染GFP的細胞，隨細胞傳代次數(shù)的增加，其GFP熒光強度會逐漸減弱。若實驗要求需要維持熒光強度，可以加入嘌呤霉素進行再次篩選。建議收到細胞后至少傳3代，凍存留種后再進行篩選。

初次進行細胞篩選時，建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的培養(yǎng)基維持培養(yǎng)，若無細胞漂浮或者漂浮較少，即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的培養(yǎng)基繼續(xù)篩選，以此類推，至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過程中，漂浮細胞大于60%，則停止篩選，換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng)，至細胞密度約80%，可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進行篩選。當(dāng)加入5ug/ml嘌呤霉素時細胞正常增殖，可停止篩選，用不含藥培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。

運輸和保存

干冰運輸及復(fù)蘇好存活細胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的處理

1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認(rèn)細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）半貼細胞和貼壁不牢（懸?。┘毎?/span>T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱中約2-3h，顯微鏡下觀察細胞的情況，若細胞密度在60%以下，客戶需收集T25瓶中的懸浮細胞離心后用培養(yǎng)基重懸后打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，若細胞生長70%-90%對細胞進行傳代，傳代時需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細胞離心后回收。

4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。       

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備

1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%

注意：此細胞貼壁不牢，生長前期懸浮細胞較多，后期貼壁細胞較多，建議傳代和換液時回收培養(yǎng)基中懸浮的細胞。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細胞處理

1）凍存細胞的復(fù)蘇

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達70%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

 LLC+GFP 小鼠肺癌細胞綠色熒光標(biāo)記