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MN9D 小鼠中腦多巴胺能神經(jīng)元細(xì)胞

細(xì)胞介紹

N18TG2與來自14日齡C57BL / 6J小鼠胚胎的喙中腦神經(jīng)元融合而建立的細(xì)胞。是一種永生化的含多巴胺的神經(jīng)元雜交細(xì)胞系。當(dāng)MN9D細(xì)胞與視頂（一個(gè)不接受多巴胺能神經(jīng)支配的大腦區(qū)域）的原代胚胎細(xì)胞共聚時(shí)，它們的多巴胺含量，酪氨酸羥化酶免疫反應(yīng)性和酪氨酸羥化酶mRNA顯著降低。通過與胚胎丘腦的細(xì)胞共聚集產(chǎn)生了多巴胺含量的類似降低，胚胎丘腦是另一個(gè)沒有多巴胺能神經(jīng)支配的大腦區(qū)域。MN9D細(xì)胞與來自紋狀體或皮層的多巴胺感受細(xì)胞的共聚集對MN9D細(xì)胞的多巴胺含量沒有明顯的刺激作用。視頂細(xì)胞產(chǎn)生的MN9D多巴胺含量的降低并沒有通過添加紋狀體細(xì)胞來逆轉(zhuǎn)。因此，MN9D雜交細(xì)胞能夠?qū)碜源竽X區(qū)域的細(xì)胞的抑制因子做出反應(yīng)，這些細(xì)胞不是多巴胺能神經(jīng)元的靶標(biāo)。產(chǎn)生兒茶酚胺的PC12細(xì)胞沒有以類似的方式反應(yīng)，這表明MN9D細(xì)胞的反應(yīng)是其中腦起源的功能。鑒于MN9D細(xì)胞對不同腦細(xì)胞群的選擇性反應(yīng)，這種雜交細(xì)胞系應(yīng)有助于研究中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的細(xì)胞 - 細(xì)胞相互作用，這些相互作用可能參與神經(jīng)遞質(zhì)表型的表達(dá)和特定神經(jīng)元連接的建立。

1）形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長
2） 含量：>1x10^6  細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。

運(yùn)輸和保存

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

細(xì)胞接收后的處理

1）收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2）請?jiān)?/span>4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。

4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備

1）準(zhǔn)備1640培養(yǎng)基，優(yōu)質(zhì)胎牛血清10%；P/S 1%.

 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二．細(xì)胞處理：

1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。 

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

MN9D 小鼠中腦多巴胺能神經(jīng)元細(xì)胞