當(dāng)你導(dǎo)師安排養(yǎng)一個(gè)沒(méi)養(yǎng)過(guò)的細(xì)胞，不知道用什么培養(yǎng)基的時(shí)候，是否也在為選培養(yǎng)基而苦惱?面對(duì)DMEM培養(yǎng)基、MEM培養(yǎng)基、F12培養(yǎng)基、1640培養(yǎng)基等種類(lèi)繁多的培養(yǎng)基時(shí)要怎么選擇呢？
這種時(shí)候大家要一起記?。?/span>
ü 沒(méi)有什么培養(yǎng)條件是jue對(duì)正確的；
ü 沒(méi)有什么細(xì)胞是咱養(yǎng)不活的；
ü 參考文獻(xiàn)沒(méi)有那就不參考了；
ü 反正文獻(xiàn)也不一定是對(duì)的；
但如果你的細(xì)胞沒(méi)STR鑒定過(guò)，沒(méi)有親自原代分離過(guò)，還各種支原體立克次氏體污染、黑膠蟲(chóng)污染，那你當(dāng)我沒(méi)說(shuō)。我勸你盡快丟掉！
讓我們先科普下培養(yǎng)基的選擇。
目前合成培養(yǎng)基主要有：
→基礎(chǔ)培養(yǎng)基（常用）
→無(wú)血清培養(yǎng)基
→無(wú)蛋白培養(yǎng)基
→限定化學(xué)成分培養(yǎng)基
它們對(duì)血清添加量的要求各不相同，目前常用的是基礎(chǔ)培養(yǎng)基?；A(chǔ)培養(yǎng)基是細(xì)胞生存的直接環(huán)境，為細(xì)胞生長(zhǎng)提供豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，并能調(diào)節(jié)培養(yǎng)體系的 pH值和滲透壓。因此培養(yǎng)基的質(zhì)量和選擇對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)至關(guān)重要。
四種常用培養(yǎng)基的比較：
培養(yǎng)基類(lèi)型 | 基本概述 | 組成成分 | 適用范圍 | 應(yīng)用范圍 |
RPMI-1640 Medium | RPMI-1640廣泛應(yīng)用于哺乳動(dòng)物、特殊造血細(xì)胞、正?；驉盒栽錾陌准?xì)胞，雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)，是目前應(yīng)用十分廣泛的培養(yǎng)基。 | 含有還原劑谷胱甘肽、高濃度的維生素，生物素。WEI生素B12以及PABA。 | HeLa、JurkatMCF -7 PC12PBMC、星形片質(zhì)細(xì)胞，癌細(xì)胞K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴細(xì)胞、T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞以及HCT-15上皮細(xì)胞等均可參考使用。 | 尤其適用于懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)。 |
MEM（Minimum Essential Medium） | 也稱(chēng)最di必需培養(yǎng)基，它僅含有12種必需氨基酸、谷氨酰胺和8種維生素。成分簡(jiǎn)單，可廣泛適應(yīng)各種已建成細(xì)胞系和不同地方的哺乳動(dòng)物細(xì)胞類(lèi)型的培養(yǎng)。 | 僅含有12種必需氨基酸、谷氨酰胺和8種維生素。 | MEM-Alpha一般用于培養(yǎng)一些難培養(yǎng)細(xì)胞類(lèi)型，而其它沒(méi)有特殊之處的細(xì)胞株則幾乎均可采用MEM來(lái)培養(yǎng)。HeLaBHK-21 293 T、HEP-2、HT-1080、MCF-7、成纖維細(xì)胞，原代大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞等。 | 適于各種哺乳動(dòng)物細(xì)胞的生長(zhǎng)。 |
DMEM高糖（標(biāo)準(zhǔn)型） | DMEM-高糖（標(biāo)準(zhǔn)型） 是一種應(yīng)用十分廣泛的培養(yǎng)基，可用于許多哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng),更適合高密度懸浮細(xì)胞培養(yǎng)。 | DMEM培養(yǎng)基 與MEM培養(yǎng)基相比，氨基酸的含量增加了2倍，維生素增加了4倍，同時(shí)還增加了非必須氨基酸、微量鐵離子以及丙酮酸鈉氨基酸。 | 適用于附著性較差，但又不希望它脫離原來(lái)生長(zhǎng)點(diǎn)的克隆培養(yǎng)，也可用于雜交瘤中骨髓瘤細(xì)胞和DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細(xì)胞的培養(yǎng)。原代成纖維細(xì)胞 神經(jīng)元膠質(zhì)細(xì)胞、HUV EC、平滑肌細(xì)胞 HeLa293T、PC-12等細(xì)胞系。 | DMEM高糖型:應(yīng)用于生長(zhǎng)快、粘附性低的細(xì)胞，雜交瘤的骨髓瘤細(xì)胞、克隆細(xì)胞、DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細(xì)胞、原代病毒宿主細(xì)胞，單一細(xì)胞。 |
DMEM/ F12 | DMEM/F12培養(yǎng)基適于克隆密度的培養(yǎng)。F12培養(yǎng)基成分復(fù)雜，含有多種微量元素，和DMEM以1：1結(jié)合，稱(chēng)為DMEM/F12培養(yǎng)基（DME/F12medium），作為開(kāi)發(fā)無(wú)血清配方的基礎(chǔ)，以利用F12含有較豐富的成分和DMEM含有較高濃度的營(yíng)養(yǎng)成分為優(yōu)點(diǎn)。 | DMEM/F-12 DMEM培養(yǎng)基和Hams F-12培養(yǎng)基的1:1混合物。 | 該培養(yǎng)基適用于血清含量較低條件下哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。為了增強(qiáng)該培養(yǎng)基的緩沖能力，改良之一是在DMEM/F12（1：1）中加入15mMHEPES緩沖液。MDCK 神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、人內(nèi)皮細(xì)胞、大鼠成纖維細(xì)胞等。 | 1.廣泛用于支持多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞的生長(zhǎng)； 2.無(wú)血清培養(yǎng)基的基礎(chǔ): 3.低血清含量下哺乳動(dòng) 物細(xì)胞的培養(yǎng)以及克隆密度培養(yǎng)。 |
一、常見(jiàn)貼壁細(xì)胞培養(yǎng)條件：
1.接種濃度5×10*8個(gè)細(xì)胞/L；
2.培養(yǎng)基：MEM或DMEM，胎牛血清濃度：10%-80%；
3.37℃，5%CO2培養(yǎng)箱；
4.起始培養(yǎng)減少震蕩，防止貼壁細(xì)胞脫落。
二、常見(jiàn)懸浮細(xì)胞培養(yǎng)條件：
1.原代培養(yǎng)時(shí)盡量去紅；
2.短期培養(yǎng)可選擇添加10%胎牛血清的RPMI 1640；長(zhǎng)期培養(yǎng)淋巴細(xì)胞時(shí)，要加入細(xì)胞因子；
3.37℃，5%CO2培養(yǎng)箱；
4.每隔3天進(jìn)行半量換液。
本期內(nèi)容：DMEM、MEM、F12、1640培養(yǎng)基區(qū)別在哪里?
下期內(nèi)容：如何讓細(xì)胞“凍"起來(lái)？
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