Sulfo-Cy3 maleimide，水溶CY3-馬來酰亞胺

結(jié)構(gòu)式：

磺化Cy3是Cy3(Cyanine 3)的水溶型。它的光譜性質(zhì)和Cy3類似，在熒光顯微鏡下發(fā)橘黃色熒光。它的熒光很亮，并且對pH不敏感，一般可以用530nm-561nm的激光束激發(fā)然后用 TRITC (tetramethylrhodamine) 的濾片觀察，所以在絕大部分熒光儀器上都可以使用。標(biāo)記后，樣品背景熒光一般認(rèn)為比TAMRA等系列的染料低。 磺化Cy3可以用來標(biāo)記蛋白，抗體，多肽，核酸等各種生物分子。

馬來酰亞胺(maleimide)是生物標(biāo)記反應(yīng)中常用的基團(tuán)，它可以和巰基(-SH)通過親和加成反應(yīng)生成穩(wěn)定的巰醚(thioester)結(jié)構(gòu)從而實(shí)現(xiàn)標(biāo)記。盡管胺基(比如賴氨酸精氨酸側(cè)鏈)也有親和性，但在中性或微酸性緩沖液中，馬來酰亞胺選擇性標(biāo)記巰基(反應(yīng)速度比胺基快>1000倍)。標(biāo)記反應(yīng)反應(yīng)迅速，選擇性高，產(chǎn)率好，另外，巰基是一種在生物分子中廣泛存在的官能團(tuán)，比如蛋白中的半胱氨酸(cysteine)和雙硫鍵等，因此馬來酰亞胺/巰基(maleimide/thiol)標(biāo)記已成為僅次于NHS/胺基標(biāo)記的常用生物連接反應(yīng)(bioconjugation)。

磺化Cy3-馬來酰亞胺的水溶性*高，所以在標(biāo)記反應(yīng)中不需要使用有機(jī)共溶劑，特別適合標(biāo)記對有機(jī)溶劑敏感的生物分子。另外磺化Cy3水溶性*好，并且染料分子本身帶電荷，標(biāo)記到生物分子表面后不會引發(fā)疏水性聚集，提高熒光標(biāo)記產(chǎn)物的穩(wěn)定性。磺化Cy3-馬來酰亞胺也溶于甲醇，DMSO，DMF等有機(jī)溶劑，標(biāo)記反應(yīng)也可以在純有機(jī)溶劑中進(jìn)行

磺化Cy3-馬來酰亞胺標(biāo)記后的產(chǎn)物Ex/Em是550/566nm。

注意事項

· 磺化Cy3水溶性高，*性強(qiáng)，如需脂溶性標(biāo)記染料，請選擇普通Cy3-馬來酰亞胺。

· 天然生物分子中巰基一般于氧化狀態(tài)(如雙硫鍵)存在，在馬來酰亞胺標(biāo)記前，務(wù)還原劑(如DTT，TCEP)活化巰基并除去多余還原劑。

· 馬來酰亞胺也可以和疊氮化合物反應(yīng)，應(yīng)避免疊氮官能團(tuán)。

· 標(biāo)記反應(yīng)不要放在強(qiáng)光下，因為大部分熒光化合物在強(qiáng)光下長時間照射會緩慢光漂泊(photobleaching)。

熒光光譜：

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