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一、產(chǎn)品簡介

CHO細胞專用轉(zhuǎn)染試劑盒——PolyTool™ CHO-Fit Transfection Reagent Kit，是一款高效經(jīng)濟的核酸轉(zhuǎn)染試劑，專門用于在CHO懸浮細胞進行重 組蛋白生產(chǎn)的試劑盒，包含轉(zhuǎn)染試劑、稀釋液、無血清培養(yǎng)基、補料、增強劑等組分，具有操作簡單、價格便宜、 蛋白產(chǎn)量高等優(yōu)點。

PolyTool™ CHO-Fit Transfection Reagent Kit適用范圍：CHO細胞的高密度無血清懸浮培養(yǎng)、DNA 瞬時轉(zhuǎn)染及蛋白表達。

二、實驗操作流程

1.細胞接種（以25mL體系為例）：

根據(jù)細胞狀態(tài)，選擇合適的接種密度，建議接種密度為2.5~3×10⁶ cells/mL，待第二天細胞密度達到6×10⁶ cells/mL左右，活性大于95%時進行轉(zhuǎn)染。

2.瞬時轉(zhuǎn)染：

建議質(zhì)粒（μg）與試劑（μL）參考配比區(qū)間為1:2~1:4之間。具體步驟如圖1所示（以1:3為例）：

（1）使用本樣品前渦旋混勻5秒，使用1.25 mL PolyTool™ CHO Medium稀釋75 μL的轉(zhuǎn)染試劑，并吹打均勻；

（2）使用1.25 mL PolyTool™ CHO Medium稀釋25 μg質(zhì)粒，并吹打混勻；

（3）將(1)和(2)所述溶液混合均勻；

（4）將(3)所述混合溶液室溫靜置孵育10~15 min；

（5）將(4)中的復合物溶液加入25 mL的細胞培養(yǎng)體系中，放回搖床中，在37 ℃、震蕩速度120 rpm下繼續(xù)培養(yǎng)。

3.產(chǎn)物表達與檢測：

（1）轉(zhuǎn)染24小時、72小時、120小時、168小時后加入3%（0.75 mL/25 mL）PolyTool™ CHO S1補料、0.3%（75 μL/25 mL）PolyTool™ CHO S2補料。

若想獲得高表達效果，24 小時添加完補料后，將細胞轉(zhuǎn)移至32℃搖床培養(yǎng)箱中進行低溫表達（葡萄糖控制在 4~8 g/L）。

（2）轉(zhuǎn)染后第 6~8 天測定產(chǎn)物表達量。大多數(shù)蛋白的合成在轉(zhuǎn)染后第7天左右可達到最高值，客戶可根據(jù)細胞狀態(tài)及表達量選擇適宜的收獲時間。

圖1 細胞轉(zhuǎn)染示意圖

CHO細胞專用轉(zhuǎn)染試劑盒PolyTool™ CHO-Fit Transfection Reagent Kit代理——天津益元利康生物科技有限公司，成立于2018年，坐落于天津經(jīng)濟技術(shù)開發(fā)區(qū)。公司產(chǎn)品線涉及細胞與基因治療、免疫學、分子生物學、細胞生物學等多個方向，專注于生命科學試劑、耗材、細胞、儀器等產(chǎn)品銷售，經(jīng)營的品牌主要有：ThermoFisher、Sigma、Qiagen、EZBioscience、ZYMO Research、MedKoo、Abcam等等。我們提供質(zhì)優(yōu)價美的產(chǎn)品、及時到位的服務，努力成長為生命科學和生物技術(shù)企業(yè)的優(yōu)質(zhì)供應商。