核心組分
胰蛋白酶：切割賴(lài)氨酸/精氨酸羧基端肽鍵（最適pH 7-8）
胰淀粉酶：水解多糖α-1,4糖苷鍵（輔助消化細(xì)胞外基質(zhì)）
膠原酶（部分配方含）：特異性分解膠原蛋白（增強(qiáng)組織解離）
作用機(jī)制
細(xì)胞間連接破壞鈣離子螯合劑增強(qiáng)效果細(xì)胞外基質(zhì)降解單細(xì)胞懸浮
注：0.25%胰酶-EDTA溶液為通用型消化液
| 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/th> | 推薦濃度 | 處理時(shí)間 | 適用細(xì)胞類(lèi)型 |
|---|---|---|---|
| 常規(guī)傳代 | 0.05%-0.1% | 3-5分鐘 | HEK293、Hela |
| 原代細(xì)胞分離 | 0.25% | 15-30分鐘 | 肝細(xì)胞、神經(jīng)元 |
| 組織塊消化 | 0.1%+膠原酶 | 1-2小時(shí)（37℃） | 腫瘤組織、皮膚活檢 |
預(yù)處理
PBS清洗2次（ce底去除血清抑制物）
消化液預(yù)熱至37℃（酶活性提升30%）
消化控制
加入消化液體積：覆蓋培養(yǎng)皿表面（例：6孔板加1mL/孔）
顯微鏡下觀察：細(xì)胞間隙擴(kuò)大→邊緣卷曲（立即終止）
終止方法
含血清培養(yǎng)基中和（體積≥3倍消化液）
離心參數(shù)：1000rpm ×5分鐘（保留細(xì)胞活性）
| 檢測(cè)指標(biāo) | 標(biāo)準(zhǔn)要求 | 檢測(cè)方法 |
|---|---|---|
| 酶活力 | ≥250 USP units/mg | N-苯甲酰-L-精氨酸檢測(cè)法 |
| 微生物 | 無(wú)菌檢測(cè)陰性 | 膜過(guò)濾培養(yǎng)法 |
| 內(nèi)毒素 | ＜0.1 EU/mL | 鱟試劑法（LAL） |
消化不wan全：
→ 增加鈣離子濃度（添加1mM CaCl?）
→ 改用含膠原酶的復(fù)合消化液
細(xì)胞損傷嚴(yán)重：
→ 縮短消化時(shí)間至1-2分鐘（分階段觀察）
→ 采用低濃度胰酶（0.02%）持續(xù)震蕩消化
支原體污染風(fēng)險(xiǎn)：
→ 選擇γ射線滅菌產(chǎn)品（非濾過(guò)除菌）
→ 操作全程在生物安全柜中進(jìn)行
無(wú)動(dòng)物源胰酶：
重組酶技術(shù)（避免病毒污染風(fēng)險(xiǎn)）
植物源替代品（適用于敏感細(xì)胞系）
智能溫控消化系統(tǒng)：
溫度感應(yīng)自動(dòng)終止（精度±0.5℃）
集成式細(xì)胞計(jì)數(shù)功能（實(shí)時(shí)監(jiān)控消化進(jìn)程）
定向修飾酶：
基因工程改造酶切位點(diǎn)特異性（減少細(xì)胞表面受體損傷）
中科百抗代理——天津益元利康生物科技有限公司，成立于2018年，坐落于天津經(jīng)濟(jì)技術(shù)開(kāi)發(fā)區(qū)。公司產(chǎn)品線涉及細(xì)胞與基因治療、免疫學(xué)、分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)等多個(gè)方向，專(zhuān)注于生命科學(xué)試劑、耗材、細(xì)胞、儀器等產(chǎn)品銷(xiāo)售，經(jīng)營(yíng)的品牌主要有：ThermoFisher、Sigma、Qiagen、EZBioscience、ZYMO Research、MedKoo、Abcam、BioLegend等等。我們提供質(zhì)優(yōu)價(jià)美的產(chǎn)品、及時(shí)到位的服務(wù)，努力成長(zhǎng)為生命科學(xué)和生物技術(shù)企業(yè)的優(yōu)質(zhì)供應(yīng)商。
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