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2023/02/14
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本視頻為普諾賽凍存細胞收貨處理指南，對每一步操作都做了演示，以便實驗者在收到細胞后，能正確地處理和復蘇。
凍存細胞復蘇實驗準備：
將15mL離心管、T25細胞培養(yǎng)瓶、移液管、電動移液器等物品提前放入生物安全柜中，紫外照射30min消毒滅菌，細胞*培養(yǎng)基提前30min放至37℃預(yù)熱備用。
凍存細胞收貨處理步驟
1. 收到細胞后，檢查外包裝是否完整；
2. 打開外包裝，取出保存于干冰中的細胞；
3. 檢查凍存管是否有破損，內(nèi)容物是否融化；
4. 將取出的凍存管迅速放入37℃水浴鍋中融化；
5. 凍存管用75%酒精消毒，放入生物安全柜中；
6. 將5ml*培養(yǎng)基加入15ml離心管中備用；
7. 將凍存管中的細胞懸液加入到準備好的培養(yǎng)基中，輕輕混勻；
8. 將15mL離心管放入離心機中離心，1000rpm/min（約200g）離心3-5min；
9. 將5ml*培養(yǎng)基加入到T25培養(yǎng)瓶中備用；
10. 取出離心好的細胞，酒精消毒后放入安全柜中；
11. 輕輕吸去離心好的細胞上清；
12. 加入1ml*培養(yǎng)基重懸細胞；
13. 將重懸好的細胞加入到準備的T25培養(yǎng)瓶中，輕輕混勻；
14. 在顯微鏡下觀察接種的細胞狀態(tài)及密度；
15. 將培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
注意事項：
1）操作凍存細胞時應(yīng)使用手套、工作服和防護面具等，以避免事故的發(fā)生；
2）復蘇細胞時，應(yīng)保持管蓋擰緊，將管蓋以下部分浸入37℃水浴中解凍，解凍過程要快；
3）部分比較脆弱的細胞可不用離心，直接用培養(yǎng)基稀釋細胞懸液后進行培養(yǎng)，但要及時通過換液等方式除去含DMSO的細胞凍存液；
4）請參照細胞說明書推薦的培養(yǎng)基和操作方法來培養(yǎng)細胞。
