微血管內(nèi)皮細胞（microvascular endothelial cells,MVECs）構(gòu)成了血液與組織液之間的物理屏障，而且在機體的凝血與抗凝血、致炎與抗炎及免疫應答等方面起著十分重要的作用，其體外培養(yǎng)模型廣泛應用于相關(guān)研究。但由于不同組織器官的微血管內(nèi)皮細胞之間存在較大的異質(zhì)性，同時微血管內(nèi)皮細胞因解剖部位不同，在形態(tài)學、表型和功能上等方面也存在明顯異質(zhì)性，不同來源的血管內(nèi)皮細胞之間是不可相互替代的，主要包括腸、肺、心臟、腦、脈絡膜、視網(wǎng)膜、真皮微血管內(nèi)皮細胞等。
本期細胞學堂為大家整理了微血管內(nèi)皮細胞的提取、培養(yǎng)和鑒定方法及步驟，幫助您快速上手開展實驗。
提取方法
微血管內(nèi)皮細胞的提取和培養(yǎng)有酶消化培養(yǎng)法、組織塊培養(yǎng)法、免疫磁珠法。
酶消化培養(yǎng)法
采用消化酶將對應組織內(nèi)細胞間質(zhì)如基質(zhì)、膠原蛋白、纖維蛋白等解離，使細胞分散，形成單細胞懸液后再接種進行培養(yǎng)的方法。
主要包括：實驗動物及日齡的選擇(根據(jù)取材部位決定動物日齡）→對應部位的取材→組織的剪碎及清洗→加酶消化→離心去酶→計數(shù)后接種培養(yǎng)→細胞純化→細胞鑒定；
組織塊培養(yǎng)法
是將從體內(nèi)取出的組織剪切成一定大小的組織塊后，接種于培養(yǎng)瓶進行的培養(yǎng)。
主要包括：試驗動物及日齡的選擇(根據(jù)取材部位決定動物日齡）→對應部位的取材→組織的剪切→接種培養(yǎng)。
免疫磁珠法
通過在磁珠表面包被具免疫反應性的抗體進行抗原抗體反應，篩選或去除所標記的細胞，達到陽性或陰性選擇細胞的目的。
主要包括：實驗動物及日齡的選擇(根據(jù)取材部位決定動物日齡）→對應部位的取材→組織的剪碎及清洗→加酶消化→離心去酶→加入磁珠與細胞孵育→磁珠磁力架分選→收集沉淀技計數(shù)→接種培養(yǎng)。
大鼠肺微血管內(nèi)皮細胞提取示意圖[1]
各種提取方法的優(yōu)劣勢
酶消化
培養(yǎng)法
可以在短時間內(nèi)得到大量細胞，但是操作繁瑣，易污染，純化步驟多，需要使用昂貴的膠原酶，導致成本偏高，并且酶濃度和消化時間需要摸索；
組織塊
培養(yǎng)法
成功率較高，成本低，適合于組織量少的原代培養(yǎng)，但是細胞遷出時間不好把握且組織塊去除不徹-底會造成其它雜細胞污染；
免疫
磁珠法
得到的細胞純度高，但是成本高，需要較多的細胞以備篩選和純化。
鑒定指標
顯微鏡觀察鑒定
可以初步觀察細胞形態(tài)和生長規(guī)律，細胞呈鵝卵石典型的鋪路石樣、多角形、梭形，細胞核大而清晰；
貼塊法獲取的肺微血管內(nèi)皮，呈鋪路石樣
貼塊法獲取微血管內(nèi)皮細胞后進行消化轉(zhuǎn)瓶，消化轉(zhuǎn)瓶或者傳代后細胞形態(tài)有變化
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大鼠腦微血管內(nèi)皮細胞提取過程[2]
特異性標志
目前使用較多的是FactorⅧ、 vWF、和CD31的陽性表達。
●參考文獻●
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