如何做好生物制藥公司的滅菌設備驗證
一、 法規(guī)要求
GMP指南（無菌藥品）
GB8599-2008大型蒸汽滅菌器技術要求自動控制型
藥品生產(chǎn)驗證指南2003
二、 內(nèi)容
1.GMP指南（無菌藥品）
博維-狄克實驗（BD實驗）、氣密性實驗、空載熱分布測試、滿載熱分布和熱穿透實驗、微生物挑戰(zhàn)性實驗、呼吸器的評估、在驗證等。
2.GB8599-2008大型蒸汽滅菌器技術要求-自動控制型
蒸汽滲透（BD實驗）、橡膠負載的滅菌效果、溫度參數(shù)、滿負載溫度、真空泄露。
3.藥品生產(chǎn)驗證指南2003
概況、生物指示劑選用、F0值選擇、空載狀態(tài)熱分布、裝載熱穿透實驗、生物指示劑驗證。
三、 標準
1.GMP指南（無菌藥品）
1.1博維-狄克實驗（BD實驗）
內(nèi)部指示卡色條呈現(xiàn)均勻變色
1.2氣密性實驗
不應超出1.3kPa/10min
1.3空載熱分布測試
無硬性標準，考察設備本身性能變化滿載熱分布與空載熱分布相同：同一時刻各點之間的差值應不超過2度。
1.4滿載熱分布和熱穿透實驗
F0值大于12。
1.5微生物挑戰(zhàn)性實驗
滅菌程序可以實現(xiàn)10-6的存活概率。
2.GB8599-2008大型蒸汽滅菌器技術要求-自動控制型
2.1蒸汽滲透（BD實驗）
變色均勻
2.2橡膠負載的滅菌效果
生物指示劑不再具有生物活性，陽性對照具有生物活性。
2.3溫度參數(shù)
滅菌溫度為下限，上限為+3度。
2.4真空泄露
壓力上升速度不應超過0.13kPa/min。
3.藥品生產(chǎn)驗證指南2003
3.1空載狀態(tài)熱分布
各測溫點間的溫差允許在±1度之內(nèi)。
3.2氣密性實驗
抽真空使內(nèi)室壓力為7kPa（或以下）關閉全部連接閥門，記錄時間與壓力，等待300秒，但不得超過600秒，讓滅菌器冷凝水汽化，然后記錄時間與壓力，600秒±10秒，再記錄一次，計算600秒內(nèi)的升壓速率。
4.空載熱分布測試
至少10個探頭（較大15-20），幾何中心和角落代表性，溫度傳感器及冷凝水放口放置，需進行3次測試。
5.滿載熱分布和熱穿透實驗
進行3次測試，明確裝載布置圖。
6.微生物挑戰(zhàn)性實驗
指示劑位置應靠近溫度探頭的位置
7.呼吸器的評估完整性測試
8.再驗證
通常為12個月
再驗證監(jiān)控運行數(shù)據(jù)的資料回顧，以證明滅菌程序無偏離趨勢
這里說明下，再驗證涉及到的新名詞：工藝標準和工藝執(zhí)行標準，后面會進行詳解。
四、空腔負載實驗
藥品生產(chǎn)驗證指南2003
概況：對設備結構，功能與操作進行描述
生物指示劑選用121度濕熱滅菌采用嗜熱脂肪芽孢桿菌
F0值選擇過度熱殺F0值12；殘存概率F0值8，一般F0值12屬于有效殺滅。
空載狀態(tài)熱分布冷凝水排放口（一般冷點）放置一個熱電偶，運行3次。
裝載熱穿透實驗確定裝載方式下冷點，在最大和最小裝載下分別進行。
生物指示劑驗證同GMP指南，提及滅菌前生物負荷檢查中未檢出耐熱孢子。
五、滅菌設備驗證流程
驗證前的URS(用戶需求標準）-FDS（功能標準）-DQ（設計確定）FAT（工程測試）IQ-OQ-PQ（安裝-運行-性能確認）就不多說了，這是標準流程一個不能少。
以上標準流程做完后才是真正滅菌柜驗證的開始。
這里有個重點要畫下來，考試要考的，就是偏差管理，變更控制。
5.1工藝標準與工藝執(zhí)行標準
每一種產(chǎn)品為了達到有效的滅菌，最后設定的標準不一定就是工藝標準，在這里在引進個說法叫工藝執(zhí)行標準。
工藝執(zhí)行標準是為了達到工藝標準而根據(jù)產(chǎn)品情況和設備情況經(jīng)驗證得來的執(zhí)行標準。
這里要說明的是我們滅菌的實現(xiàn)是工藝標準當中定的，這個是變不了的。舉個例子來說比如說115度，30分鐘或者121度15分鐘，這個是不能變的，這是工藝標準。我們?yōu)榱诉@個工藝標準，根據(jù)我們產(chǎn)品特性和設備情況所做的結果，也就是說驗證出來的結果，我們設定的值，這個叫工藝執(zhí)行標準。為了達到115度30分鐘的工藝滅菌標準經(jīng)驗證得出我們需要在設備上設定115度32分鐘才能使滅菌器腔體內(nèi)所有的點都滿足工藝標準，因此在實際執(zhí)行中我們設定的滅菌器標準是115度32分鐘。
就像剛才舉的例子，只有在操作規(guī)程中說明按照工藝執(zhí)行標準來進行操作，才能達到我們工藝標準的要求。工藝標準和工藝執(zhí)行標準，這是兩個概念。
工藝執(zhí)行標準是為了達到工藝標準，而設定的一個標準，是我們實際操作的寫入SOP中的。但不是工藝規(guī)程和STP當中的內(nèi)容。
工藝執(zhí)行標準是會變化的，所以再驗證就很主要了。要按時進行在驗證或者根據(jù)設備及產(chǎn)品的情況進行再驗證
而且工藝執(zhí)行標準是個變值，它會根據(jù)我們產(chǎn)品的不同以及我們設備連續(xù)使用的情況，或者使用年限而進行一定量的變更或者是變化的，甚至包括我們設備更換零配件也會對工藝執(zhí)行標準產(chǎn)生一定影響。
5.2BD試驗
在性能確認中：BD測試目的為了測試冷空氣排放效果，而冷空氣的存在主要影響有兩個：一是純蒸汽參雜冷空氣影響熱穿透效果。二是滅菌器內(nèi)水分降低，影響殺滅效果。驗證進行BD測試，證明其設計無誤，再驗證無需進行。
5.3冷點位置
空載熱分布確定冷點位置，滅菌過程始終高于121度，計算極差值。
由于我們的這個基礎架構能力和材料能力越來越好，對于現(xiàn)在的滅菌柜，這個冷點位置和以前會有不同，但這個冷水凝結的地方一定會對我們滅菌效果產(chǎn)生影響，而且冷水凝結的地方，一般的情況下是不會變的。
5.4裝載方式
滿載確定滿載量及擺放方式，作為日常負載依據(jù)。在滅菌的時候，如非必要千萬不要變更擺放方式。一旦變更擺放方式之后，我們一定要重新做驗證。因為在擺放邊方式變更的時候，絕對會對我們滿載熱穿透有很大的影響。
5.5生物指示劑試驗
確認預定的滅菌程序能夠在產(chǎn)品滅菌后，微生物存活率＜10-6。
5.6脈動真空滅菌柜空載探頭布點原則
實際的探頭數(shù)量和布點位置只有一個目的，保證取樣點的代表性，能夠反饋出測試目標的性能。
GMP指南內(nèi)容
至少10個探頭（較大15-20），幾何中心和角落代表性，溫度傳感器及冷凝水排放口放置。
5.7再驗證周期
1.儀表校正應每季度進行一次，或根據(jù)內(nèi)部有關校驗周期的規(guī)定進行校驗。
2.微生物標定物試驗應每季度進行一次。
3.熱分布試驗應每年進行一次。
任何重大變更（改變裝載狀態(tài)，改變滅菌時間等）或重大維修完成后，均要進行驗證，以證明不同變更對已驗證的滅菌系統(tǒng)的滅菌效果沒有不良影響。
實際使用中可以根據(jù)自己品種及設備的情況制定相關要求
數(shù)據(jù)的匯總和分析也是比較重要的環(huán)節(jié)，更主要的是重現(xiàn)性！
最后給大家個公式有興趣的可以手動計算F0值，，計算公式：F0=ΔtΣ10(T－121)/10
華譜&澤恒是專注于為生物制藥行業(yè)提供實驗室儀器計量校準、GMP驗證服務/3Q驗證/設備確認/廠房驗證的專業(yè)服務商。我們給制藥客戶解決的是一站式QC/QA/工程/驗證等事業(yè)部的質(zhì)控外包服務。
我們活躍于許多關鍵市場領域，從細胞/基因治療領域、抗體藥方向、干細胞治療到疫苗生產(chǎn)等生物制藥領域，一直以來都是圍繞生物醫(yī)藥客戶實現(xiàn)讓“讓制藥體系更安全"為使命，提高服務的效率、降低行業(yè)的成本、踐行好的客戶服務體驗。自主品牌：華譜（上海）檢測技術有限公司、澤恒計量檢測（北京）有限公司。
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