人多能干細(xì)胞（hPSC）具有自我更新和分化為各種細(xì)胞類(lèi)型的潛能，為醫(yī)學(xué)、藥物研發(fā)和生命科學(xué)研究提供了不少貢獻(xiàn)。近年來(lái)，隨著生物技術(shù)的發(fā)展，hPSC的培養(yǎng)技術(shù)不斷優(yōu)化，其中多層細(xì)胞工廠(chǎng)作為一種高效的2D培養(yǎng)方法，逐漸受到研究者的關(guān)注。本文將為您揭秘如何通過(guò)多層細(xì)胞工廠(chǎng)進(jìn)行hPSC的2D培養(yǎng)。

一、多層細(xì)胞工廠(chǎng)的優(yōu)勢(shì)

1. 高密度培養(yǎng)：多層細(xì)胞工廠(chǎng)采用層疊式設(shè)計(jì)，可充分利用空間，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的高密度培養(yǎng)，提高產(chǎn)量。

2. 易于操作：細(xì)胞工廠(chǎng)的操作簡(jiǎn)便，便于規(guī)?；a(chǎn)。

3. 條件均一：細(xì)胞工廠(chǎng)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，有利于細(xì)胞生長(zhǎng)和分化。

4. 產(chǎn)量可控：通過(guò)調(diào)整細(xì)胞工廠(chǎng)的層數(shù)，可輕松實(shí)現(xiàn)產(chǎn)量的調(diào)控。

二、如何通過(guò)多層細(xì)胞工廠(chǎng)進(jìn)行hPSC的2D培養(yǎng)

1. 細(xì)胞接種

將hPSC接種到預(yù)先處理過(guò)的細(xì)胞工廠(chǎng)中，確保細(xì)胞均勻分布。接種密度可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求進(jìn)行調(diào)整。

2. 日常培養(yǎng)

接種后第1、3和4/5天進(jìn)行補(bǔ)料，監(jiān)測(cè)配套燒瓶以確定最佳收獲日期（≥ 90%匯合度）。具體操作如下：

（1）將廢培養(yǎng)基倒入廢液瓶中，更換新鮮培養(yǎng)基。

（2）更換培養(yǎng)基后放回培養(yǎng)箱。

3. 收獲細(xì)胞

當(dāng)配套燒瓶匯合度達(dá)到90 - 95％時(shí)（接種后第5 - 6天）收獲細(xì)胞工廠(chǎng)的hPSC。具體步驟如下：

（1）將用過(guò)的培養(yǎng)基倒入廢液瓶中。

（2）用200 mL PBS沖洗細(xì)胞工廠(chǎng)。

（3）添加200 mL TrypLE™ Express或0.25%胰蛋白酶-EDTA。

（4）37°C孵育8 - 10分鐘。

（5）將200 mL ACF酶抑制溶液或TeSR™-AOF添加到燒瓶中，混勻后倒入無(wú)菌1 L瓶中。

（6）用400 mL無(wú)菌PBS沖洗細(xì)胞工廠(chǎng)，倒入同一無(wú)菌收集瓶中。

（7）將細(xì)胞懸浮液分裝到離心管中，離心后去除殘留的解離試劑，重新懸浮并匯集細(xì)胞。

三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1. 未分化狀態(tài)的標(biāo)志物表達(dá)

從細(xì)胞工廠(chǎng)收獲的hPSC表達(dá)了未分化狀態(tài)的標(biāo)志物，如OCT-4和TRA-1-60，超過(guò)90%的細(xì)胞均表達(dá)這兩種標(biāo)記物。

2. 冷凍后仍保持高活力并有效附著

從細(xì)胞工廠(chǎng)收獲的單細(xì)胞hPSC在-135°C的FreSR™-S中冷凍后，仍保持高活力并有效附著。

3. 三譜系分化

從細(xì)胞工廠(chǎng)收獲的hPSC具有三譜系分化能力，可分化為定形內(nèi)胚層、早期中胚層和神經(jīng)祖細(xì)胞。

4. 保持正常核型

從細(xì)胞工廠(chǎng)收獲的hPSC保持正常核型，擴(kuò)大培養(yǎng)規(guī)模后，細(xì)胞未檢測(cè)到額外的拷貝數(shù)變異。

通過(guò)本文的介紹，相信您已對(duì)如何通過(guò)多層細(xì)胞工廠(chǎng)進(jìn)行hPSC的2D培養(yǎng)有了深入了解。多層細(xì)胞工廠(chǎng)作為一種高效的2D培養(yǎng)方法，為hPSC的研究和應(yīng)用提供了有力支持。在今后的研究中，多層細(xì)胞工廠(chǎng)將繼續(xù)發(fā)揮其優(yōu)勢(shì)，助力hPSC領(lǐng)域的發(fā)展。

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