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HT-1080 LifeAct穩(wěn)定細(xì)胞系
HT-1080 LifeAct穩(wěn)定細(xì)胞系
應(yīng)用領(lǐng)域
- 活細(xì)胞成像的細(xì)胞骨架組織和動力學(xué)
- 基于細(xì)胞的功能性測定，例如趨化性和遷移
- 在實(shí)驗(yàn)中可用作特征對照
為了創(chuàng)建穩(wěn)定的LifeAct-TagGFP2表達(dá)細(xì)胞系，用編碼TagGFP2標(biāo)記的LifeAct的質(zhì)粒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染人纖維肉瘤細(xì)胞。
請?jiān)诖颂幷业接嘘P(guān)LifeAct的詳細(xì)信息。
HT-1080 LifeAct-TagGFP2細(xì)胞具有高度動態(tài)的絲狀肌動蛋白。通過穩(wěn)定的LifeAct表達(dá)，可以實(shí)現(xiàn)具有極低背景熒光的絲狀肌動蛋白的可視化。此外，對細(xì)胞的*表征表明它們顯示出與野生型（wt）細(xì)胞相同的行為。
由于細(xì)胞系的快速生長和接觸抑制的缺乏，它構(gòu)成了理想的腫瘤模型。這些特征與明亮且特異的F-肌動蛋白染色相結(jié)合，形成了一種功能強(qiáng)大的工具，可廣泛應(yīng)用于活細(xì)胞成像和高內(nèi)涵方法。
技術(shù)特點(diǎn)
- 同類細(xì)胞池
- 保證細(xì)胞系身份
- 純度測試
- 顯微鏡檢測的轉(zhuǎn)基因表達(dá)
技術(shù)指標(biāo)
| 細(xì)胞/小瓶 | 5 x 10 5 |
| 介質(zhì) | ibidi冷凍培養(yǎng)基 |
| 存儲 | 液氮 |
| 生物安全等級 | 1個(gè) |
| 不育性 | 測試酵母和細(xì)菌， 包括支原體 |
| 發(fā)起人 | CAG（修飾的雞β-肌動蛋白） |
| 轉(zhuǎn)基因 | LifeAct-TagGFP2 * |
產(chǎn)地信息
| 生物 | 智人（人類） |
| 資源 | 結(jié)締組織病：纖維肉瘤 |
| 年齡 | 35歲 |
| 性別 | 男 |
| 種族 | 高加索人 |
| 生長特性 | 附著的 |
| 形態(tài)學(xué) | 上皮的 |
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在此處下載完整的“ Actin可視化”應(yīng)用指南，以PDF格式。
HT-1080 LifeAct-TagGFP2的基本表征
基因組表征：
通過短串聯(lián)重復(fù)序列（STR）分析對人類細(xì)胞系進(jìn)行基因組認(rèn)證，已廣泛用于確保細(xì)胞系的同一性和研究細(xì)胞系的純度。
人類基因組中的短串聯(lián)重復(fù)多態(tài)性用于區(qū)分個(gè)體。通過鑒定基因組中典型位置的特定序列的短重復(fù)序列，有可能創(chuàng)建單個(gè)人類（如法醫(yī)所用）或細(xì)胞系的遺傳圖譜。
使用上述方法分析了ibidi的HT-1080 LifeAct-TagGFP2細(xì)胞。該分析是由DSBZ（一家經(jīng)過ISO認(rèn)證的萊布尼茲研究所）進(jìn)行的。分析顯示，HT-1080 LifeAct-TagGFP2細(xì)胞與HT-1080野生型細(xì)胞相同。
細(xì)胞增殖分析：
使用與培養(yǎng)起點(diǎn)相同的定義條件，將HT-1080 LifeAct-TagGFP2和野生型細(xì)胞培養(yǎng)8天，然后每天分析細(xì)胞數(shù)。
該實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明，兩種細(xì)胞系在預(yù)定的時(shí)間內(nèi)均以相同的速率生長。使用統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)證實(shí)了該結(jié)果。
細(xì)胞群體的熒光強(qiáng)度：
使用流式細(xì)胞儀分析了HT-1080 LifeAct-TagGFP2和野生型細(xì)胞的熒光強(qiáng)度和陽性細(xì)胞數(shù)。
與野生型細(xì)胞相比，至少95％的細(xì)胞具有熒光，平均熒光強(qiáng)度有兩個(gè)對數(shù)偏移。
HT-1080 LifeAct-TagGFP2的功能表征
趨化性2D和3D
HT-1080 LifeAct-TagGFP2和野生型細(xì)胞的化學(xué)趨化分析在µ-Slide化學(xué)趨化分析中進(jìn)行了分析，使用胎牛血清（FCS）作為化學(xué)引誘劑（更多詳細(xì)信息，請參見應(yīng)用筆記17）。
這些測定的結(jié)果表明，HT-1080 LifeAct-TagGFP2細(xì)胞以與野生型細(xì)胞相同的速度和正向遷移指數(shù)（FMI）遷移。這些結(jié)果使用學(xué)生t檢驗(yàn)進(jìn)行了確認(rèn)。p <0.05被認(rèn)為是顯著的。
傷口愈合：
將HT-1080 LifeAct-TagGFP2和野生型細(xì)胞接種在與Culture-Insert結(jié)合的µ-Slide 8 孔中。經(jīng)過24小時(shí)的視頻顯微鏡檢查后，使用WimScratch自動化軟件解決方案分析了傷口閉合情況。
HT-1080 LifeAct-TagGFP2和野生型細(xì)胞顯示出相當(dāng)?shù)募?xì)胞前沿速度。這些結(jié)果使用學(xué)生t檢驗(yàn)進(jìn)行了確認(rèn)。p <0.05被認(rèn)為是顯著的。
注：楊清辰發(fā)布
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