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技術(shù)文章

流式細胞技術(shù)科研實驗技術(shù)服務(wù)介紹

閱讀:203          發(fā)布時間:2024-9-24
流式細胞技術(shù)


應(yīng)用簡介
       流式細胞技術(shù)(flowcytometry,FCM)是利用流式細胞儀進行的一種單細胞定量分析和分選技術(shù)。流式細胞術(shù)是單克隆抗體及免疫細胞化學(xué)技術(shù)、激光和電子計算機科學(xué)等高度發(fā)展及綜合利用的高技術(shù)產(chǎn)物。
技術(shù)原理
       流式細胞儀使懸浮在液體中分散的經(jīng)熒光標記的細胞或微粒逐個通過樣品池,同時由熒光探測器捕獲熒光信號并轉(zhuǎn)換成分別代表前向散射角、側(cè)向散射角和不同熒光強度的電脈沖信號,經(jīng)計算機處理形成相應(yīng)的點圖,直方圖和加三維結(jié)構(gòu)圖像進行分析。用于FCM的樣本是單細胞懸液,可以是血液、懸浮細胞培養(yǎng)液、各種體液、新鮮實體瘤的單細胞懸液以及石蠟包埋組織的單細胞懸液等。
服務(wù)內(nèi)容
       1、細胞表面分子的檢測與分析;
       2、細胞內(nèi)或細胞核內(nèi)抗原檢測與分析,如胞內(nèi)細胞因子、調(diào)節(jié)性T細胞(Treg,CD4+CD25+Foxp3+);
       3、細胞凋亡的檢測與分析——如PI單染法、Annexin-V-PI復(fù)染法、末端轉(zhuǎn)移酶標記技術(shù)(TUNEL)、細胞周期特異性細胞凋亡的檢測(PI-Annexin-V,PA法);
       4、DNA含量檢測與細胞周期的分析——如藥物對細胞周期的影響、流式細胞核型分析;
       5、細胞增殖的檢測與分析;

流式細胞分選儀基本原理
技術(shù)特點
       1、少量細胞分選時,流式細胞分選精確度高(99%以上),速度快。目前,先進的流式細胞儀的分選速度可達25000個細胞/秒以上,比傳統(tǒng)的分選速度提高了很多倍,原來需要一天的工作現(xiàn)在只需要幾小時就能完成。不過流式細胞儀分離細胞的量還是有一定的限制,一次分離的最大合理量約為108個細胞。如果細胞量超過109個,則需要耗費10小時以上,分選后細胞的活力會受到很大的影響。
       2、可以同時進行多個Marker分選,正選負選同時進行。以前的流式細胞儀只能給液滴充上正電荷或負電荷,因此在電場中只能向左或向右偏轉(zhuǎn),即兩路分選?,F(xiàn)在的儀器可以給液滴充以不同的電量,從而調(diào)整液滴的偏轉(zhuǎn)角度,實現(xiàn)多路分選。BD的FACSAria流式細胞儀就可以進行四路分選。
       3、不僅僅限于表面抗原,流式細胞儀可以根據(jù)任何能檢測到的發(fā)光度(如細胞體積)或熒光(如DNA、RNA或蛋白含量,酶活性,特異抗原)散射度差異來分離細胞。如果能保證流式細胞儀的無菌狀態(tài),那么分選后的細胞還可以進行培養(yǎng)或其他分析。
       4、如果只是偶爾做幾次細胞分選的話,用流式分選還是比較劃算的,只需要準備樣品和抗體,交納一定的儀器使用費即可,不需要購買配套的設(shè)備。
 
 


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