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應用簡介
       簡單來講，CRISPR/Cas9是一種分子生物學技術(shù)，通過這種技術(shù)科研人員可以對細胞和生物體內(nèi)的基因進行編輯。所謂的基因編輯就是通過某種生物手段和技術(shù)，對生物體內(nèi)的遺傳物質(zhì)進行修改?；谠松锏墨@得性免疫系統(tǒng)研發(fā)出的CRISPR/Cas9技術(shù)只包含兩種重要的成分，一種是行使DNA雙鏈切割功能的Cas9蛋白，而另一種則是具有導向功能的sgRNA（single guide RNA）。當細胞內(nèi)同時表達sgRNA和Cas9蛋白時，Cas9蛋白通過與sgRNA結(jié)合，靶向到目的DNA序列上發(fā)揮DNA雙鏈切割的功能。DNA序列被切割產(chǎn)生斷裂后，引發(fā)細胞內(nèi)部的DNA修復機制（DNA repair）。真核細胞同時存在著同源重組修復和非同源重組修復。在同源重組修復下，斷裂的染色體以另一條完整的姐妹染色單體為模板進行DNA修復，而在非同源重組修復下，斷裂出的DNA隨機修復，引入新的堿基，使基因產(chǎn)生移碼突變。
技術(shù)原理
       CRISPR/Cas9系統(tǒng)的工作原理是crRNA (CRISPR-derived RNA) 通過堿基配對與 tracrRNA (trans-activating RNA) 結(jié)合形成 tracrRNA/crRNA 復合物，此復合物引導核酸酶 Cas9 蛋白在與 crRNA 配對的序列靶位點處剪切雙鏈 DNA，從而實現(xiàn)對基因組DNA序列進行編輯；而通過人工設計這兩種 RNA，可以改造形成具有引導作用的gRNA (guide RNA)，用以引導 Cas9 對 DNA 的定點切割。
       靶位點的選擇要求：
       1、靶位點主要包括20 個堿基，并且這20個堿基后面是NGG的PAM 區(qū)；
       2、靶位點盡量選擇在基因編碼區(qū)的前端；
       3、轉(zhuǎn)化應選擇對應抗性的LB平板培養(yǎng)基。
實驗方法

技術(shù)總結(jié)
Crispr/Cas9慢病毒特點： 
1、適用于在同一個細胞系中需要進行多個基因敲除的實驗；
2、基因敲除效率比直接質(zhì)粒轉(zhuǎn)染更高；
3、提供多種不同熒光和抗性標記的慢病毒表達載體，更易篩選到基因敲除成功細胞；
4、接受cas9蛋白穩(wěn)定表達不同細胞系定制。
Crispr/Cas9腺病毒特點：
1、可感染多種分裂期和非分裂期細胞，感染效率高、敲除效率高；
2、操作簡單，容易掌握；
3、基因敲除周期短，成本低；
4、適合哺乳動物不同種屬不同基因的操作，適用范圍廣。