適用范圍：本方法適用于BOD5或等于2mg/L并且不超過6000mg/L的水樣。BOD5大于6000mg/L的水樣仍可用本方法，但由于稀釋會造成誤差，有必要要求對測定結果做慎重的說明。本試驗得到的結果是生物化學和化學作用共同產生的結果，它們不象單一的、有明確定義的化學過程那樣具有嚴格和明確的特性，但是它能提供用于評價各種水樣質量的指標。本試驗的結果可能會被水中存在的某些物質所干擾，那些對微生物有毒的物質，如殺菌劑、有毒金屬或游離氯等，會抑制生化作用。水中的藻類或硝化微生物也可能造成虛假的偏高結果。
原理：將水樣注滿培養(yǎng)瓶，塞好后應不透氣，將瓶置于恒溫條件下培養(yǎng)5天。培養(yǎng)前后分別測定溶解氧濃度，由兩者的差值可算出每升水消耗掉氧的質量，即BOD5值。由于多數(shù)水樣中含有較多的需氧物質，其需氧量往往超過水中可利用的溶解氧（DO）量，因此在培養(yǎng)前需對水樣進行稀釋，使培養(yǎng)后剩余的溶解氧（DO）符合規(guī)定。一般水質檢驗所測BOD5只包括含碳物質的耗氧量和無機還原性物質的耗氧量。有時需要分別測定含碳物質耗氧量和硝化作用的耗氧量。常用的區(qū)別含碳和氮的硝化耗氧的方法是向培養(yǎng)瓶中投加硝化抑制劑，加入適量硝化抑制劑后，所測出的耗氧量既為含碳物質的耗氧量。在5天培養(yǎng)時間內，硝化作用的耗氧量取決于是否存在足夠數(shù)量的能進行此種氧化作用的微生物，原污水或初級處理的出水中這種微生物的數(shù)量不足，不能氧化顯著量的還原性氮，而許多二級生化處理的出水和受污染較久的水體中，往往含有大量硝化微生物，因此測定這種水樣時應抑制其硝化反應。在測定BOD5的同時，需要葡萄糖和谷氨酸標準溶液完成驗證試驗。
操作步驟
1樣品預處理
1.1樣品的中和
如果樣品的pH不在6-8之間，先做單獨試驗，確定需要用的鹽酸溶液或氫氧化鈉溶液的體積，再稱樣品，不管有無沉淀形成。
1.2含游離氯或結合氯的樣品
加入所需體積的氫氧化鈉溶液，使樣品中自由氯和結合氯失效，注意避免過量。
2試驗水樣的準備
將試驗樣品溫度升至約20°C，然后再半充滿的容器內搖動樣品，以便消除可能存在的過飽和氧。
將已知體積樣品置于稀釋容器中，用稀釋水或接種稀釋水稀釋，輕輕地中和，避免夾雜空氣泡。
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