新的色譜柱柱活化沖洗技巧

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新的色譜柱柱活化沖洗技巧

方法/步驟

一、新的色譜柱活化：采用100%甲醇1ml/min沖洗60min，再換成流動相進行平衡；如果流動相中含有緩沖鹽，在換成流動相前，請使用過渡流動相過渡后再換流動相平衡；

二、日常維護

1、建議檢測前樣品和流動相進行過濾；

2、建議每天做完樣品后及時進行清洗；

3、常規(guī)檢測

測試完后，直接把色譜柱反向連接采用90%有機相沖洗45min，最后保存在純甲醇或純乙腈中；

4、使用緩沖鹽條件：

1）等度條件：使用緩沖鹽之前和之后都用過渡流動相以1ml/min流速沖洗45min；

2）梯度條件：使用緩沖鹽之前與初始流動相組成相同的過渡流動相以1ml/min流速沖洗45min；

注意：過渡流動相是指有機相和水相比例與分析流動相相同比例，只是不含有緩沖鹽；

3）緩沖鹽沖洗干凈后，采用90%有機相反向沖洗60min，最后保存在純有機溶劑中；

注意：如果使用緩沖液不能存留色譜柱中過夜；

三、色譜柱的保存

1. 短時間內色譜柱的保存

  如果使用時間間隔不超過四天，則色譜柱無需特別的維護，只需根據最后一次測試使用的流動相或樣品的性質，在使用后用純甲醇、純水或甲醇與水的混合溶液進行淋洗，直至基線走平約半小時即可。

 2. 長時間色譜柱的保存

如色譜柱長時間不用，則最好將其從HPLC儀中取下保存，取下前用合適的溶劑淋洗，洗去不適與保存色譜柱的洗脫液，如C18反相柱可以用純甲醇或乙腈作為保存的介質，然后用塑料塞頭將其塞緊，以免色譜柱內*干燥。

END

注意事項

色譜柱使用pH范圍在1.5～10.0，通常建議使用范圍pH為2.0～8.0比較合適，流動相超出pH范圍將會導 致硅膠基質流失和鍵合相斷裂使柱效下降，使用壽命變短，所以要嚴格控制pH范圍

                                                                                                                                           本篇轉載至實驗之家