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正常組織細胞操作有以下步驟
閱讀：971 發(fā)布時間：2018-11-16正常組織細胞敏感性可達156Pg/ml，操縱簡樸 ，重復(fù)性良好，可用于IL-8的基礎(chǔ)和臨床研究。在嚴峻感染病人的血清中、炎癥局部滲出液中都可檢測到高水平的IL-8。此外，近年來的研究表明，IL-8可能與各種組織缺血后再灌注損傷的發(fā)生有關(guān)，包被緩沖液、PBS、底物緩沖液配制同常規(guī)ELISA法。封鎖液或抗體稀釋液應(yīng)新鮮配制或凍存，注意事項待檢標本如為血清，應(yīng)采用一次性容器，血液采集后盡快(6小時以內(nèi))分離血清。原理采用兩株識別不同表位的抗IL-8單克隆抗體，其中一株(4D7)作為包被抗體，以識別和結(jié)合待檢標本中的IL-8，另一株作為酶標抗體，與結(jié)合于包被抗體的IL-8的另一個表位結(jié)合并催化底物顯色。試劑器材包括ELISA試劑盒提供包被抗體、酶標抗體、尺度品，底物(ABTS)、96孔ELISA板。Il-8是一種分子量為8～10kD的多肽，對嗜中性粒細胞，T淋巴細胞、嗜鹼性粒細胞具有趨化作用，并可激活嗜中性粒細胞，是一種重要的炎癥介質(zhì)。
正常組織細胞操作步驟
1. 包被：pH9.5 碳酸鹽緩液稀釋4D7單克隆抗體粗提γ球蛋白至1μg/ml，加入96孔板，100μl/孔，放4℃，36小時。
2. 封閉：0.1％吐溫PBS(Buffer A)沖洗96孔板三次，加3％BSA Buffer A(Buffer B)200μl/孔，放37℃，1小時。
3. 加待檢樣品：Buffer A 沖洗96孔板三次，加待檢樣品及Buffer B 稀釋的標準品100μl/孔，放37℃，3小時。
4. 加酶標抗體：Buffer A沖洗96孔板五次，3％PEG Buffer A稀釋酶標抗體至1∶800，加入96孔板，100μl/孔，放37℃，1小時。
5. 顯色：Buffer A沖洗96孔板五次，pH5.4檸檬酸緩沖液溶解底物(ABTS)，0.2mg/ml，加3％H2O2，2μl/ml，加入96孔板，100μ/孔，室溫下或37℃顯色。
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