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白色念珠菌PCR試劑盒操作步驟夾心法
閱讀：1479 發(fā)布時(shí)間：2020-9-23白色念珠菌PCR試劑盒操作方法：
雙抗體夾心法
1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。(簡(jiǎn)稱洗滌，下同)。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔)。
3. 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時(shí)，洗滌。
4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10~30分鐘。
改良 Frey 氏培養(yǎng)基基礎(chǔ) 澳洲茄胺 ?異硫氫酸兔抗人、大、小鼠、兔 β-Amyloid 1-42IgG
改良 Frey 氏培養(yǎng)基基礎(chǔ)添加劑 β-桉葉醇 ?β淀粉樣肽1-42 C端IgG
改良 Frey 氏固體培養(yǎng)基基礎(chǔ) 艾黃素 ?β淀粉樣肽25-35IgG
支原體培養(yǎng)基基礎(chǔ) D-阿拉伯糖醇 ?β淀粉樣肽31-35IgG
支原體培養(yǎng)基基礎(chǔ)添加劑 阿多尼弗林堿 ?14-3-3蛋白IgG
支原體固體培養(yǎng)基 阿卡波糖 ?磷酸化14-3-3 ζIgG
支原體固體培養(yǎng)基添加劑 安五脂素 ?2，4-二氯苯氧乙酸IgG
營(yíng)養(yǎng)瓊脂NA 安格洛苷C ?4E結(jié)合蛋白1IgG
馬丁肉湯 阿奇霉素 ?磷酸化4E結(jié)合蛋白1IgG
馬丁肉湯 阿馬堿 ?磷酸化4E結(jié)合蛋白1IgG
馬丁瓊脂 9-氨基喜樹堿 ?磷酸化eIF4E結(jié)合蛋白IgG
5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結(jié)果判定:可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以"+"、"-"號(hào)表示。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽性。
間接法
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜;
2.次日洗滌3次;
3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌;
4.(同時(shí)做空白、陰性及陽性孔對(duì)照)于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml;
5.37℃孵育35-60分鐘，洗滌;
6.'后一遍用DDW洗滌。