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真核表達(dá)細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn):重組DNA易轉(zhuǎn)染,遺傳穩(wěn)定,可重復(fù);識(shí)別和去除內(nèi)含子;進(jìn)行翻譯后修飾;磷酸化、糖基化、二硫鍵、寡聚體等的形成、高級結(jié)構(gòu)的正確折疊;產(chǎn)品的構(gòu)型正確率高,可被改造成類人體源性, 免疫源性好;可分泌至培養(yǎng)基,提純工藝簡單,成本低;可用于基因治療。細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)能誘導(dǎo)高效表達(dá),對表達(dá)的蛋白進(jìn)行正確折疊,并進(jìn)行復(fù)雜糖基化修飾,蛋白活性接近于天然蛋白,不需去除內(nèi)毒素,周期較長,操作復(fù)雜,需要細(xì)胞房,無菌,成本投入高。
真核表達(dá)細(xì)胞啟動(dòng)子介紹及作用分析: RNA聚合酶(II)結(jié)合并起動(dòng)轉(zhuǎn)錄的DNA序列。
一般包括轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)及其上游約100-200bp序列,包含有若干具有獨(dú)立功能的DNA序列元件,每個(gè)元件約長7-30bp。
核心啟動(dòng)子元件: RNA聚合酶起始轉(zhuǎn)錄所必需的最小DNA序列,包括轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)及其上游-25/-30bp處的TATA盒。單獨(dú)起作用時(shí)只能確定轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)和產(chǎn)生基礎(chǔ)水平的轉(zhuǎn)錄。
上游啟動(dòng)子元件包括通常位于-70bp附近的CAAT盒和GC盒、以及距轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)更遠(yuǎn)的上游元件。與相應(yīng)的蛋白因子結(jié)合改變轉(zhuǎn)錄效率。不同基因具有不同的上游啟動(dòng)子元件組成,其位置也不相同,即不同的基因表達(dá)分別有不同的調(diào)控。