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哺乳動物細(xì)胞真核表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)勢有人想知道嗎

2021-4-14  閱讀(962)

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   哺乳動物細(xì)胞真核表達(dá)系統(tǒng)則是通過脂質(zhì)體或者是PEI的等轉(zhuǎn)染試劑在體外通過和質(zhì)粒形成復(fù)合體, 將質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)胞后進(jìn)行瞬時(shí)表達(dá)。稱為瞬時(shí)表達(dá)的原因是因?yàn)橘|(zhì)粒在真核細(xì)胞中不能擴(kuò)增。并且不斷被細(xì)胞所降解,這種表達(dá)在一定的時(shí)間后就會消失。除非質(zhì)粒被整合進(jìn)入細(xì)胞的基因組,通過質(zhì)粒上帶的篩選標(biāo)記,通過篩選得到一株穩(wěn)定表達(dá)你的目的蛋白的細(xì)胞克隆。但是這種細(xì)胞克隆的表達(dá)量相比瞬時(shí)表達(dá)會非常低甚至于檢測不到。真核表達(dá)的特點(diǎn)是所表達(dá)的蛋白一旦表達(dá)即擁有相應(yīng)的生物學(xué)活性,因此真核瞬時(shí)轉(zhuǎn)染往往用于研究單個(gè)基因在細(xì)胞中的功能。而不能用于純化蛋白。
  此外,哺乳動物細(xì)胞真核表達(dá)系統(tǒng)還有用于昆蟲細(xì)胞的桿狀病毒表面展示系統(tǒng),其本質(zhì)也是通過轉(zhuǎn)染含有目的基因的重組質(zhì)粒(特殊質(zhì)粒,用于桿狀病毒表面展示系統(tǒng))給昆蟲細(xì)胞,然后使用野生型的桿狀病毒或者是人工改造過的桿狀病毒來感染相應(yīng)的細(xì)胞,來是病毒和質(zhì)粒在昆蟲細(xì)胞體內(nèi)發(fā)生重組,獲得目的基因,并且最終表達(dá)于病毒子的表面,所以成為表面展示系統(tǒng)。
  哺乳動物細(xì)胞真核表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)勢能實(shí)現(xiàn)翻譯后修飾及正確的蛋白折疊復(fù)性:哺乳動物為真核細(xì)胞,細(xì)胞器可以對蛋白正確折疊加工。表達(dá)水平高:載體可在哺乳動物細(xì)胞中高表達(dá)重組蛋白,表達(dá)量可高達(dá)1-3g/L蛋白表達(dá)高效穩(wěn)定:高效啟動子控制,穩(wěn)定表達(dá),并可以選擇多種表達(dá)系統(tǒng)選項(xiàng):瞬時(shí)表達(dá)、穩(wěn)定細(xì)胞株表達(dá)、營養(yǎng)缺陷型細(xì)胞株表達(dá)、大規(guī)模懸浮細(xì)胞表達(dá)等適合大規(guī)模蛋白表達(dá):常用的哺乳動物表達(dá)宿主細(xì)胞,使用懸浮細(xì)胞培養(yǎng),可以在一個(gè)月內(nèi)可產(chǎn)生數(shù)克級蛋白。
 

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