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在生物藥品分析中的應(yīng)用～培養(yǎng)液的氨基酸監(jiān)測～
閱讀：952 發(fā)布時間：2021-7-10生物藥品多為通過細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)的蛋白質(zhì)類藥品。在蛋白質(zhì)生產(chǎn)的培養(yǎng)工序中，對溶氧量、PH值、溫度等各種工藝參數(shù)的監(jiān)測或 控制至關(guān)重要。另外培養(yǎng)液中的氨基酸是重要的營養(yǎng)源，因此該監(jiān)測有助于掌握細(xì)胞狀態(tài)、研討培養(yǎng)條件、研究最佳培養(yǎng)液組成。 此次我們向您介紹使用L-8900全自動氨基酸分析儀，對在不同培養(yǎng)條件下的培養(yǎng)液中的各種氨基酸濃度進(jìn)行監(jiān)測的結(jié)果。能 夠進(jìn)行多成分同步分析并具有的定量精度的氨基酸分析儀，以其高分離度而著稱，可為培養(yǎng)工序的研究開發(fā)及品質(zhì)管理提供 有價值的信息。
■氨基酸監(jiān)測的樣品和色譜條件
＜生理體液分析法色譜條件＞ 色譜柱 ： #2622PF 4.6 mm I.D. × 60 mm 保護(hù)柱 ： #2619F 4.0 mm I.D. × 5 mm 脫氨柱 ： #2650L 4.6 mm I.D. × 40 mm 流動相 ： PF Buffer Kit 流速 ： 0.35 mL/min 柱溫 ： 32 ～ 70 ℃ 反應(yīng)液 ： Ninhydrin coloring solution kit for HITACHI 反應(yīng)液流速 ： 0.3 mL/min 反應(yīng)溫度 ： 135 ℃ 檢測波長 ： VIS 570 nm、440 nm 進(jìn)樣量 ： 20 μL
＜樣品＞ 細(xì)胞 ： CHO細(xì)胞 (CRL-9606) 培養(yǎng)槽 ： 1 L 通風(fēng) ： 僅液面通風(fēng)(Air、O2、N2、CO2的混合氣體) 培養(yǎng)基 ： Ham’sF12 + 10 % FBS 在以下條件的培養(yǎng)過程中，定時采樣，進(jìn)行了分析。
＜預(yù)處理＞ 培養(yǎng)液與濃度5%的三氯yi酸溶液以1 : 1混合 ↓ 離心分離 10,000 rpm、10 min ↓ 過濾 Pore Size 0.2 μm ↓ 分析用樣品
?標(biāo)準(zhǔn)樣品的測定中，此次介紹的氨基酸中，Thr、Gly、Ala的峰保留時間的重現(xiàn)性為RSD = 0.05 ～ 0.07 %，峰面積的重現(xiàn)性為 RSD = 0.15 ～ 0.19 %，得以確認(rèn)茚三酮柱后衍生法的高度重現(xiàn)性。(均為 n=3)(產(chǎn)品規(guī)格如下。峰保留時間的重現(xiàn)性：0.5 % 以內(nèi)(Ala)、0.3 % 以內(nèi)(Arg)；峰面積的重現(xiàn)性：1.5 % 以內(nèi)(Gly、 His))
?通過監(jiān)測培養(yǎng)液中各種氨基酸的濃度，可獲知培養(yǎng)過程中各成分的盈缺，因此有助于探討最佳培養(yǎng)液組成。另外，基于培養(yǎng)條件 的不同，可見日立氨基酸含量的變化出現(xiàn)差異的成分。可以認(rèn)為這反映出細(xì)胞內(nèi)的處理過程已發(fā)生變化，產(chǎn)生的蛋白質(zhì)也可能不同， 因此培養(yǎng)液中氨基酸的同步監(jiān)測可作為抗體藥物生產(chǎn)領(lǐng)域中生產(chǎn)管理的有效指標(biāo)之一。