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島津推出遺傳毒性雜質(zhì)NMBA---LC-MS/MS解決方案
閱讀：1050 發(fā)布時間：2019-7-12019年3月1日，美國食品和藥物管理局(FDA)在發(fā)布血管緊張素II受體阻滯劑（ARBs）藥物氯沙坦的自愿召回公告，涉及到印度Hetero Labs Ltd.生產(chǎn)的87批氯沙坦鉀片，而導(dǎo)致該召回的主要原因是發(fā)現(xiàn)其中含有N-亞硝基-N-甲基-4-氨基丁酸（NMBA）雜質(zhì)。由于NMBA是已知動物和潛在人類的致癌化學(xué)物質(zhì)，是繼N−亞硝基二jia胺（NDMA）和N−亞硝基二乙胺（NDEA）之后上市ARBs藥物中檢測到的第三種亞硝胺類遺傳毒性雜質(zhì)。此后，F(xiàn)DA相繼公布了Teva Pharmaceuticals和Vivimed Life Sciences Pvt Ltd等制藥公司自愿召回涉及氯沙坦鉀的63批藥品，其原因為檢出含有NMBA。同時，加拿大衛(wèi)生部（HC）及英國衛(wèi)生部（DHSC）也在上發(fā)布了氯沙坦類藥物的召回公告。直至2019年6月12日，Teva Pharmaceuticals仍在擴大自愿召回7批檢出NMBA氯沙坦鉀片，可見藥物中的遺傳毒性雜質(zhì)仍受到公眾及藥品監(jiān)管機構(gòu)的高度關(guān)注。
在FDA已公布的ARBs藥物亞硝胺雜質(zhì)限度表中，NMBA的日允許攝入量大值為0.96ppm。 FDA評估了暴露于9.82ppm水平NMBA相比于終生暴露于0.96ppm NMBA的服藥水平，表明6個月的暴露量不會存在患癌風(fēng)險。
N-亞硝基-N-甲基-4-氨基丁酸（NMBA）
N-Nitroso-N-methyl-4-aminobutyricacid(NMBA)
CAS. 61445-55-4
因此，為了確保患者在緩沖期可獲得氯沙坦類藥物，F(xiàn)DA不反對含NMBA低于9.82ppm的氯沙坦保持銷售。該過渡緩沖期FDA設(shè)為6個月，直至生產(chǎn)企業(yè)提供亞硝胺雜質(zhì)符合要求的氯沙坦藥物來填補市場。
目前，關(guān)于氯沙坦鉀中NMBA的檢測方法尚未見公開報道，為及時應(yīng)對市場檢測需求，島津中國推出了基于LC-MS/MS技術(shù)的檢測方法，該方法操作簡單，靈敏度高，適用性強，可有效用于氯沙坦鉀中NMBA的分析檢測。
1、 實驗部分
1.1 儀器： LCMS-8050三重四極桿質(zhì)譜儀聯(lián)用儀，含有：LC-30AD×2輸液泵，DGU-20A5R在線脫氣機，SIL-30AC自動進樣器，CTO-30A柱溫箱，CBM-20A系統(tǒng)控制器，LCMS-8050三重四極桿質(zhì)譜儀，LabSolutions（Version 5.82 SP1）色譜工作站。
1.2 分析條件：
液相色譜條件
| 色 譜 柱 | ：Shim-pack XR-ODS II 2.0 mm I.D.× 100 mm L., 2.2 μm | ||
| 流 動 相 | ：A相-0.1%甲酸水溶液；B相-甲醇 | ||
| 流 速 | ：0.3 mL/min | 柱溫 | ：40℃ |
| 進樣體積 | ：2 µL | 洗脫方式 | ：梯度洗脫 |
質(zhì)譜條件
| 離子化模式 | ：ESI，正離子檢測 | 碰撞氣 | ：氬氣 270 kPa |
| 霧化氣流速 | ：3.0 L/min | 加熱模塊溫度 | ：400℃ |
| 加熱氣流速 | ：10.0 L/min | 干燥氣流速 | ：10.0 L/min |
| 接口溫度 | ：300℃ | 掃描模式 | ：多反應(yīng)監(jiān)測(MRM) |
| DL溫度 | ：250℃ | MRM參數(shù) | ：見下表 |
1.3 標準品溶液：取NMBA標準貯備液，以純甲醇逐級稀釋為0.5、1、2、5、10、20、50、100 ng/mL的八個不同濃度的混合標準工作溶液。
1.4 樣品溶液：取氯沙坦鉀三批原料藥（符合EP9.0）0.1 g于10 mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲1 min至全部溶解，放冷至室溫，用甲醇定容待測。
2、 結(jié)果
2.1標準品色譜圖
圖1. NMBA標準品色譜圖（100 ng/mL）
（黑色-總離子流；粉色-MRM147.15/117.10；藍色-MRM147.15/87.10；棕色-MRM147.15/44.10）
2.2 線性關(guān)系及檢出定量限
圖2. NMBA標準曲線
檢出限（LOD）0.5 ng/mL(MRM147.15/117.10)，定量限（LOQ）1.0 ng/mL (MRM147.15/117.10)
2.3 精密度實驗：10 ng/mL標準溶液為樣本連續(xù)進樣，日內(nèi)及日間保留時間相對標準偏差低于0.1%，峰面積低于1.10%。
2.4 加標回收實驗
取0.1 g氯沙坦鉀樣品于10 mL容量瓶中，加入NMBA標準品溶液(相當(dāng)于50、100、200 ng NMBA標準品)，按照1.4中的方法進行處理，上機分析。加標的氯沙坦鉀溶液色譜圖（以200 ng加標量為例）見圖3。三個平行樣品的低中高平均回收率分別為98.04%，94.40%，95.61%。
圖3 NMBA加標量為200 ng時氯沙坦鉀溶液色譜圖
2.5 檢測結(jié)果：三批樣品中NMBA均低于小檢出限（LOD）。
3、 結(jié)論
本工作建立了使用LCMS-8050三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀測定氯沙坦鉀原料藥中N-亞硝基-N-甲基-4-氨基丁酸（NMBA）雜質(zhì)的方法，在0.5~100 ng/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，檢出限和定量限分別為0.5 ng/mL和1.0 ng/mL。使用此方法對三批次氯沙坦鉀原料藥進行了測定，結(jié)果為NMBA未檢出。本方法簡單、快速、靈敏、準確，可有效用于氯沙坦鉀原料藥中NMBA的分析檢測。