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對(duì)流免疫電泳實(shí)驗(yàn)的操作步驟

2023-4-11 閱讀(357)

1.瓊脂平板的制備可以根據(jù)需要選擇大玻璃平板和小玻璃載玻片。大玻璃板需要約10毫升的瓊脂,小玻璃片需要約3.5毫升。固化后打孔。該方法與瓊脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)相同。
2.添加樣品:在左孔中添加患者血清(原始血清和10倍稀釋血清各占據(jù)一個(gè)孔),在右側(cè)添加抗血清,每片均應(yīng)有陽(yáng)性對(duì)照。
3.電泳操作流程:在電泳槽高度的三分之二處添加0.05mPH8.6Barbita酸鹽緩沖液。請(qǐng)注意,兩個(gè)水箱中的液位盡可能高。將帶有樣品的玻璃板放在電泳槽上,將抗原端連接到負(fù)極,將抗體端連接到正極過濾紙浸濕后作為鹽橋,過濾紙與瓊脂板連接,其長(zhǎng)度為0.5厘米。以板寬度計(jì)算電流,以板的長(zhǎng)度計(jì)算電壓。要求電流量為2毫安/厘米,即大板為20毫安,小板為10毫安。電壓為5伏/厘米。通電2小時(shí)后觀察結(jié)果。
4.對(duì)流免疫電泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果觀察:在黑色背景上方,用多個(gè)角度的散射光觀察。兩口井之間有一條白色的沉淀線,這意味著陽(yáng)性對(duì)照應(yīng)該有一條清晰的白色沉淀線。如果是抗原,則兩極微沉淀?xiàng)l不清楚,將其在37°C下放置數(shù)小時(shí)可增強(qiáng)沉淀?xiàng)l的清晰度。




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