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上海吉至生化科技有限公司
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2019-10-8 閱讀(8297)
DEPC中文名為焦碳酸二乙酯。分子式為C6H10O5，分子量為162.14。是一種強(qiáng)烈但不*的RNA酶抑制劑。通過(guò)和RNA酶的活性基團(tuán)組氨酸的咪唑環(huán)結(jié)合使蛋白質(zhì)變性，從而抑制酶的活性，常用于生物實(shí)驗(yàn)中RNA的提取等。
DEPC毒性須知：
1．DEPC 是一種烷化劑。DEPC不穩(wěn)定，在水溶液中會(huì)分解成乙醇和二氧化碳，155℃時(shí)也會(huì)分解。DEPC遇到氨水會(huì)發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生氨基甲酸乙酯。
2．DEPC有刺激性，對(duì)眼睛和氣道粘膜有強(qiáng)刺激，在操作中應(yīng)盡量在通風(fēng)的條件下進(jìn)行，DEPC毒性并不是很強(qiáng)，但吸入的毒性是很強(qiáng)的，使用時(shí)戴口罩，不小心沾到手上注意立即沖洗。
3．DEPC是一種潛在的致癌物質(zhì)，主要是能生成乙酯基衍生物和乙酯類(lèi)衍生物，其中尿烷是一種已知的致癌物質(zhì)。
DEPC用途：
DEPC是一種有效的核酸酶抑制劑，它能夠與很多酶的-NH，-SH或-OH等基團(tuán)發(fā)生反應(yīng)，從而破壞酶的活性位點(diǎn)。一般，常用濃度為0.1%（1 L水中加入1 mL DEPC）的DEPC來(lái)作為RNA酶的抑制劑。比如，進(jìn)行RNA實(shí)驗(yàn)時(shí)，要用DEPC處理實(shí)驗(yàn)所用的水和各種溶液。
通常說(shuō)的DEPC（處理）水是指用DEPC處理過(guò)并經(jīng)高溫高壓消毒的MiliQ純水。DEPC（處理）水可以用于RNA沉淀的溶解，含有RNA的各種反應(yīng)體系如反轉(zhuǎn)錄、siRNA的退火等，以及其它各種要求無(wú)RNase、DNase和proteinase的反應(yīng)體系。
實(shí)驗(yàn)室操作中容易產(chǎn)生的誤區(qū)：
1.重復(fù)使用含DEPC的水處理槍頭、離心管等。由于DEPC較貴，而且書(shū)上說(shuō)DEPC要用高壓滅菌處理去除，于是有些人就萌發(fā)了重復(fù)使用DEPC的想法，即對(duì)含有DEPC的水不進(jìn)行高壓滅菌，從而重復(fù)使用含DEPC的水處理槍頭、離心管等。節(jié)約本是好事，但這樣的節(jié)約是無(wú)效的。為什么不能重復(fù)使用含DEPC的水，因?yàn)镈EPC在水溶液中不穩(wěn)定，極易分解，DEPC在pH6.0和pH7.0的PBS緩沖液中的半衰期分別約為20分鐘和10分鐘，DEPC在水中的半衰期約為30分鐘。因此，重復(fù)使用含DEPC的水就不能保證槍頭和離心管的RNase-free。
2.必需長(zhǎng)時(shí)間高壓滅菌來(lái)*去除DEPC。用DEPC處理過(guò)的溶液，在15－20分鐘的高壓滅菌后還可以聞到一股特殊的香味，因此有人認(rèn)為高壓滅菌去除DEPC不*，所以要延長(zhǎng)高壓滅菌的時(shí)間以*去除DEPC。但是延長(zhǎng)高壓滅菌的時(shí)間并不需要，因?yàn)槁劦降奶厥庀阄恫皇荄EPC的，而是DEPC分解產(chǎn)物之一的乙醇同溶液中殘留的微量的羧酸（如甲酸和乙酸等）反應(yīng)產(chǎn)生的揮發(fā)性脂類(lèi)。這種特殊的水果香味不代表有痕量的DEPC殘留。
3.溶液中DEPC含量約高，滅活RNase的效果越好。這個(gè)誤區(qū)錯(cuò)了一半，的確，1% DEPC能滅活高達(dá)1000 ng/ml的RNase A，而0.1% DEPC只能滅活少于500 ng/ml的RNase A。但是溶液中殘留的DEPC副產(chǎn)物會(huì)抑制一些酶反應(yīng)，例如DEPC副產(chǎn)物會(huì)抑制體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，因此DEPC含量越高，高壓滅菌后的DEPC副產(chǎn)物就越多，抑制越明顯。
