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目錄:上海貝博生物科技有限公司>>細(xì)胞分析>>細(xì)胞凋亡>> 吖啶橙染色試劑盒

吖啶橙染色試劑盒
  • 吖啶橙染色試劑盒
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更新時(shí)間：2025-03-15 09:38:10瀏覽次數(shù)：173評(píng)價(jià)

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產(chǎn)品概述 product description 吖啶橙（Acridine Orange，AO）為一種熒光染料，該染料具有膜通透性，能透過細(xì)胞膜，使核DNA和RNA染色。其激發(fā)波長為488nm，吸收波長為515nm。它與細(xì)胞中DNA和RNA結(jié)合量存在差別，復(fù)合物可發(fā)出不同顏色的熒光，紅色熒光為AO-DNA(F600nm),綠色熒光為AO-RNA或單鏈DNA(F530nm)。因此，在熒光顯微鏡下觀察，吖啶橙可透過正常細(xì)胞膜，使細(xì)胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光；而在凋亡細(xì)胞中，因染色質(zhì)固縮或斷裂為大小不等的片斷，形成凋亡小體。吖啶橙使其染上致密濃染的黃綠色熒光，或黃綠色碎片顆粒；而壞死細(xì)胞黃熒光減弱甚至消失。吖啶橙AO常與溴化乙啶EB合用雙染，因EB只染死細(xì)胞使之產(chǎn)生桔黃色熒光，由此可區(qū)分出正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞。
保存溫度
2-8℃避光
注意事項(xiàng)
1.本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。
2.螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時(shí)試劑損失。
3.樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
4.使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并清除殘留清潔劑。
5.AO有毒，避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
有效期
6個(gè)月
檢測方法
1.流式細(xì)胞儀
2.熒光顯微鏡

適用樣本
1.懸浮細(xì)胞
2.貼壁細(xì)胞
產(chǎn)品應(yīng)用
1.流式細(xì)胞儀
2.熒光顯微鏡

試劑準(zhǔn)備
1.PBS 緩沖液（pH7.4，實(shí)驗(yàn)室常用的10mM磷酸緩沖鹽溶液（1X））
2.或者HBSS（Hank's Balanced Salt Solution）
耗材準(zhǔn)備
1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套
使用注意事項(xiàng)
1.螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。
2.細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
3.染色后立即進(jìn)行分析。
4.染色時(shí)間根據(jù)不同樣本的實(shí)際染色結(jié)果做相應(yīng)調(diào)整。
使用方法
1、 染色緩沖液的配制：
根據(jù)樣品數(shù)按下列比例配制染色緩沖液。 取100μL試劑B加900μL無菌去離子水稀釋，混勻即成染色緩沖液。
2、 收集樣本細(xì)胞，細(xì)胞數(shù)量在10X105個(gè)以內(nèi)。
3、 用PBS洗滌細(xì)胞兩次。
4、 用500μL-1ml 染色緩沖液將細(xì)胞重懸，使細(xì)胞濃度約106個(gè)/ml。
5、 取95ul細(xì)胞懸液，加入5ul AO染色液。
6、 輕輕混勻后4℃避光孵育10-15分鐘。
7、 滴加至載玻片上，用蓋玻片封片。
8、 熒光顯微鏡檢測結(jié)果。激發(fā)波長為488nm。

結(jié)果分析 ：
在熒光顯微鏡下，選用488nm激發(fā)光鏡檢：AO染色正常細(xì)胞DNA呈均勻黃色或黃綠色。當(dāng)細(xì)胞凋亡時(shí)，染色質(zhì)濃縮，細(xì)胞核碎裂成點(diǎn)狀，被染成大小不一、致密濃染的綠色顆粒或黃綠色碎片。

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