使用方法
試劑準備： 根據樣本數量，用純水將O72探針10倍稀釋。充分混勻，配制成探針工作液，備用。 【注】： ?不可以一次性將探針全部稀釋。 ?現配現用。 ?也可以不稀釋探針，直接在待檢測血清樣品中加入1-2 μl探針，但是需要用好的移液器和吸頭，注意操作過程，保證探針有效的加入了樣品中，并充分混勻。 樣本檢測： 1.在96孔板中加入100微升新鮮血清樣本、10-20微升O72探針工作液，用移液器吹打，使之充分混勻。 【注】： ?注意選擇合適的96孔板，熒光檢測需要使用黑色板。 ?不同樣本的活性氧差異較大，需要根據預實驗結果調整探針用量。一般加入2-10 μl探針，染色終濃度按試劑盒中探針母液的200-1000倍稀釋，200倍稀釋適合大多數樣本。 ?如果熒光強度太強，超過了檢測儀器的量程，可以減少探針用量。保證所有樣本探針用量一致即可。 ?以酶標儀檢測為例。也可以用熒光分光光度計檢測，根據所使用儀器決定液體體積和染色容器。 2.在37℃避光孵育15-30分鐘。 3.置于熒光光度計或酶標儀中，后于激發(fā)波長為516 nm、發(fā)射波長606 nm檢測熒光強度。 【注】： ?必須使用熒光檢測專用的黑色96孔板。 ?如果熒光強度太強，超過了儀器的檢測范圍，可以將孵育后的勻漿上清液稀釋后再檢測。一般稀釋5-50倍。 ?熒光強度強則過氧亞硝基陰離子（ONOO–）含量高。 ?可以用實驗中對照血清的熒光強度值為基準，待測組血清的熒光強度值占對照血清的百分比來比較過氧亞硝基陰離子（ONOO–）程度差異。
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