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開蓋后組份按要求條件保存。

6個(gè)月

微孔板，酶標(biāo)儀

血清血漿/全血/組織

微孔板，酶標(biāo)儀

1.酶標(biāo)儀
2.離心機(jī)

1.雙蒸水

1.一次性手套
2.吸頭

1.血液中的GSH幾乎全部存在于紅細(xì)胞內(nèi)，可以用每升全血中GSH的克數(shù)來表示，也可用每克Hb中GSH含量來表示；
2.計(jì)算時(shí)應(yīng)用消光系數(shù)，故比色計(jì)要校正波長。用標(biāo)準(zhǔn)管計(jì)算較方便、準(zhǔn)確；
3.吸取上清時(shí)，用帶刻度的5ml滴管，或者移液器，避開表面的一層薄膜，插到上清液中吸取2ml做顯色反應(yīng)；
4.每批實(shí)驗(yàn)做2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管、空白管，以減少操作誤差；

試劑工作液配制 ：
1. 試劑A為過飽和溶液，如有結(jié)晶，則取上清使用；

2. GSH標(biāo)準(zhǔn)溶劑工作液：
溶劑儲(chǔ)備液：雙蒸水=1：9稀釋，即為GSH標(biāo)準(zhǔn)溶劑工作液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

3. 1mmol/LGSH標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：GSH分子量為307，每次測(cè)定前將3.07 mg的GSH標(biāo)準(zhǔn)品加到10mlGSH的溶劑工作液中，混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配。

4. 20μmol/LGSH標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制:取1mmol/LGSH標(biāo)準(zhǔn)溶液0.2ml加GSH標(biāo)準(zhǔn)溶劑工作液9.8ml，現(xiàn)用現(xiàn)配。

樣本的前處理：
1. 培養(yǎng)細(xì)胞：將收集好的細(xì)胞，用PBS清洗1~2次，低速離心收集沉淀細(xì)胞，再加入0.3-0.5ml 0.1M pH7.4的等滲PBS緩沖液重懸細(xì)胞，超聲或手動(dòng)研磨破碎細(xì)胞后待測(cè)；
上清液制備：
取破碎后的細(xì)胞懸液0.1ml,加0.1ml試劑A混勻，3500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘， 取上清液1ml待測(cè)；

2. 血清（漿）：取0.05ml,加試劑A0. 2ml混勻，3500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘， 取上清液待測(cè)；

3. 全血樣本的處理：1:9溶血液的制備：取0.1ml肝素抗凝全血加雙蒸水0.9ml，充分混勻，直至透亮為止；
上清液制備：取0.05ml,加試劑A0. 2ml混勻，3500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘， 取上清液待測(cè)；

4. 組織樣本：10%勻漿液的制備：準(zhǔn)確稱取組織重量，按重量（g）：體積（ml）=1:9比例加入9倍體積的生理鹽水，冰水浴條件下機(jī)械勻漿，2500轉(zhuǎn)/分，離心10min，取上清液待測(cè)；
上清液制備：取0.1ml,加0. 1ml試劑A 0. 1ml混勻，3500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘， 取上清液待測(cè)；


計(jì)算：

（1）全血計(jì)算公式：
全血中GSH含量 = 測(cè)定OD值 – 空白OD值 x 標(biāo)準(zhǔn)品濃度 x 樣本前處理 x 樣本測(cè)定前
（umol/L） 標(biāo)準(zhǔn)OD值 - 空白OD值 （20umol/L） 稀釋倍數(shù)（5倍）稀釋倍數(shù)（10倍）

（2）細(xì)胞及組織計(jì)算公式：

GSH含量 = 測(cè)定OD值 – 空白OD值 x 標(biāo)準(zhǔn)品濃度 x樣本前處理 ÷ 待測(cè)勻漿蛋白
（umol/gprot） 標(biāo)準(zhǔn)OD值 - 空白OD值 （20umol/L） 稀釋倍數(shù)（2倍） 濃度（gprot/L）

（3）血清（漿計(jì)算公式）

GSH含量 = 測(cè)定OD值 – 空白OD值 x 標(biāo)準(zhǔn)品濃度 x樣本前處理
（umol/L） 標(biāo)準(zhǔn)OD值 - 空白OD值 （20umol/L） 稀釋倍數(shù)（5倍）