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2-8℃ 避光

開蓋后組份按要求條件保存。

6個(gè)月

分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀

分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀

1.分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀
2.比色皿或96孔板

1.一次性手套

1.待測(cè)樣品中不能含有抑制劑，同時(shí)需要避免反復(fù)凍融；
2.在皂化過程中，震蕩不要?jiǎng)×遥悦庑纬扇榛瘜樱?br>3.檢測(cè)緩沖液如果出現(xiàn)渾濁或絮狀物，應(yīng)棄用；
4.標(biāo)準(zhǔn)梯度應(yīng)準(zhǔn)確，盡量減少不必要的誤差；
5.EC溶液有一定毒性，請(qǐng)小心操作；
6.檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)，按加樣表混合后，2min內(nèi)即出現(xiàn)明顯的藍(lán)色變化并逐漸加深，20min后藍(lán)色開始變淺，30min后逐漸呈黃綠色。620nm檢測(cè)數(shù)據(jù)表明，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，OD值在不斷下降，對(duì)應(yīng)的顏色也已發(fā)生變化，特別是高濃度的標(biāo)準(zhǔn)品變化比較大。因此，應(yīng)在出現(xiàn)最深的藍(lán)色結(jié)果且穩(wěn)定的時(shí)間段內(nèi)盡快檢測(cè)，而且建議每次同時(shí)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品（0.3~0.5mg/ml）和樣品。
7.如有條件，用酶標(biāo)儀檢測(cè)，減少因檢測(cè)時(shí)間導(dǎo)致的誤差；

一、試劑的準(zhǔn)備：
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：用試劑C:EC緩沖液稀釋試劑A：標(biāo)準(zhǔn)（5mg/ml）至0.5mg/ml，-20℃保存?zhèn)溆茫?br>
二、樣品的準(zhǔn)備：
取新鮮動(dòng)物心臟或肝臟等樣品，采用醇?jí)A皂化法、溶劑皂化法等（參見附錄）提取適量的提取液，-20℃保存?zhèn)溆茫?br>
三、加樣：
按照下表設(shè)置空白、標(biāo)準(zhǔn)、樣品，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免氣泡的產(chǎn)生。如果樣品中的濃度過高，可以減少樣品用量或用試劑C:EC緩沖液稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。
四、測(cè)定：
混勻，室溫避光孵育3~5min，以空白調(diào)零，比色杯光徑1cm，分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀600~640nm處檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)管或樣品管的吸光度。

五、計(jì)算：
液體樣品濃度（mg/ml）= A樣品/A標(biāo)準(zhǔn) x 0.5
液體樣品含量（mg）= A樣品/A標(biāo)準(zhǔn) x 0.5 x VT
每100g固體樣品含量（mg/g）= A樣品/A標(biāo)準(zhǔn) x 0.5 x VT x 100/m

公式中：
A樣品為樣品管的吸光度；
A標(biāo)準(zhǔn)為標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度；
0.5為標(biāo)準(zhǔn)的濃度（mg/ml）；
VT為提取液的總體積（ml）；
m為樣品的實(shí)際用量（g）