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2-8℃

1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

一年

WB,IP等

動(dòng)物細(xì)胞/組織

1.使用方便，從細(xì)胞，組織中提取蛋白不需經(jīng)過(guò)研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。
2.提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便。
3.含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
4.紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。
5.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

WB,IP等

1.離心機(jī)
2.振蕩器
3.勻漿機(jī)/勻漿器
4.渦旋混勻器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒

1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項(xiàng)：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。
? 蛋白酶抑制劑在2-8℃時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
? 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
? 如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
? 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
? 下游實(shí)驗(yàn)如果是進(jìn)行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測(cè)，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過(guò)程保持低溫操作，縮短離心時(shí)間。

細(xì)胞組蛋白提取：
1. 提取液制備：
每500 μl蛋白提取液A中加入2 μl蛋白酶抑制劑混合物混勻后置冰上備用。
2. 收集5-10×106個(gè)細(xì)胞，在4℃，1000×g條件下離心5-10分鐘，吸干上清，收集細(xì)胞。
3. 用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
4. 每5-10×106個(gè)細(xì)胞中加入500 μl蛋白提取液A，混勻后，在4℃條件下輕輕振蕩10分鐘。
5. 在4℃，16000×g條件下離心15分鐘，棄上清。
6. 沉淀中加入100 μl組蛋白提取液B。
7. 用200 μl槍頭反復(fù)吹打混勻或充分渦旋振蕩混勻。
8. 置4℃冰箱過(guò)夜存放。
9. 16000×g條件下離心10分鐘，收集上清。
10. 在上清中加入10-25 μl 試劑C充分混勻。
11. 加入上樣緩沖液混勻后煮沸，分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

組織組蛋白提取：
1. 提取液制備：
每500 μl蛋白提取液A中加入2μl蛋白酶抑制劑混合物混勻后置冰上備用。
2. 取100 mg組織樣本剪碎，加入蛋白提取液A，用組織勻漿器勻漿至無(wú)明顯肉眼可見(jiàn)固體。
3. 將組織勻漿吸入一預(yù)冷的干凈離心管中，在4℃條件下輕輕振蕩10分鐘。
4. 在4℃，16000×g條件下離心15分鐘，棄上清。
5. 沉淀中加入100 μl組蛋白提取液B。
6. 用200 μl槍頭反復(fù)吹打混勻或充分渦旋振蕩混勻，置4℃冰箱過(guò)夜存放。
7. 16000×g條件下離心10分鐘，收集上清。
8. 在上清中加入25 μl 試劑C充分混勻。
9. 加入上樣緩沖液混勻后煮沸，分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

1.Fan Wei, et al.
Molecular cloning and subcellular localization of six HDACs and their roles in response to salt and drought stress in kenaf (Hibiscus cannabinus L.)
Biological Research 2019