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目錄:上海貝博生物科技有限公司>>蛋白質生物學>>蛋白提取和裂解>> 植物核膜蛋白提取試劑盒-非酶法

植物核膜蛋白提取試劑盒-非酶法
  • 植物核膜蛋白提取試劑盒-非酶法
參考價 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準
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  • 品牌 貝博生物
  • 型號
  • 廠商性質 生產(chǎn)商
  • 所在地
屬性

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更新時間：2025-03-13 21:19:20瀏覽次數(shù)：137評價

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產(chǎn)品概述 product description 貝博® BBproExtra® 植物核膜蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種植物細胞和各種實體植物組織，如葉片、根、種子等植物組織中提取核膜蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時內(nèi)完成。制備的核蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。 本試劑盒含有的配方能夠有效溶解植物核膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。 本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。 本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。
保存溫度
2-8℃
注意事項
1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！
有效期
一年
檢測方法
WB,IP等
適用樣本
植物
產(chǎn)品特點
1.使用方便，從細胞，組織中提取蛋白不需經(jīng)過研磨、反復凍融、超聲破碎等前處理。
2.將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
3.含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
4.紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
5.蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白，又可結合釋出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
產(chǎn)品應用
WB,IP等
儀器準備
1.離心機
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
試劑準備
1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒
耗材準備
1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套
使用注意事項
使用注意事項：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
? 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
? 可以根據(jù)自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
? 提取液B在使用前須一直置于2-8℃條件，否則下游膜蛋白提取時會導致不容易分層。
? 膜蛋白電泳時loading buffer應該避免煮沸。
? 膜蛋白電泳時可以提高loading buffer的SDS含量。

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使用方法
1. 提取液制備：
每300 μl提取液B中加入2 μl蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
2. 取洗凈擦干后并去除葉梗和粗脈的200-500 mg植物組織樣本用刀盡可能剪碎，加入1 ml 提取液A后用勻漿機/勻漿器充分勻漿。
3. 將勻漿用100 μm細胞篩過濾。
4. 將濾液在100×g條件下離心3分鐘，棄沉淀，收集上清。
5. 在1000×g條件下離心15分鐘，棄上清，收集沉淀。
6. 在沉淀中加入200-300 μl冷的提取液B，充分混勻。
7. 置振蕩器2-8℃振蕩30分鐘。
8. 在4℃，12000×g條件下離心15分鐘，將上清吸入另一干凈離心管。
9. 在37℃水浴/氣浴10分鐘。
10. 在37℃，1000×g力離心5-10分鐘，此時溶液分為兩層，下層是膜蛋白約為20-30 μl。
11. 小心移除上層液體，留下層。
12. 用30-100 μl冷的試劑C膜蛋白溶解液溶解下層膜蛋白部分，即得膜蛋白。
13. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?br>
常見問題分析
1.蛋白濃度低？
植物核膜蛋白豐度比較低，在條件允許的情況下，盡可能增加樣本量。
處理部分樣本時可能沒有裂解，導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑B的處理時間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑B中含有干擾Bradford法的組份，導致定量不準。如果已經(jīng)進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

3.提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結構，沒有對蛋白質之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構象和活性。

4.膜蛋白電泳沒有條帶？
膜蛋白樣品通常濃度較低，電泳前一定要進行蛋白定量，以保證電泳是蛋白上樣量足夠。
膜蛋白提取好后，用溶解液充分溶解后，可以超聲處理一下，再進行蛋白定量。
蛋白加Loading buffer后可以不用煮沸，采用50℃保溫30分鐘。
蛋白Loading buffer中SDS終濃度含量可以提高至3%-10%。
有些樣品的膜蛋白含量太低，可以使用丙酮沉淀膜蛋白，再使膜蛋白溶解于上樣緩沖液中，一般可以跑出清晰的蛋白條帶。
電泳時采用低電壓低電流電泳。
膜蛋白豐度通常較低，有條件可以嘗試用銀染染色。

參考文獻
1.Yu Du, et al.
Phytophthora infestans RXLR effector PITG20303 targets a potato MKK1 protein to suppress plant immunity
New Phytologist 2020 （IF=8.512）

2.Li Sun, et al.
Endogenous ABA alleviates rice ammonium toxicity by reducing ROS and free ammonium via regulation of the SAPK9–bZIP20 pathway
Journal of Experimental Botany 2020 （IF=5.36）

3.Binhui Zhan, et al.
Functional Scanning of Apple Geminivirus Proteins as Symptom Determinants and Suppressors of Posttranscriptional Gene Silencing
Viruses. 2018 （IF=3.761）

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