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參考價	面議

蛋白質(zhì)生物學

蛋白提取和裂解

細胞器分離

蛋白純化

蛋白質(zhì)濃縮和緩沖液置換

蛋白定量

蛋白凝膠電泳

免疫組織化學

貝博生物

產(chǎn)品概述 product description 貝博® BBproExtra® 植物核蛋白和細胞質(zhì)蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種植物細胞和各種實體植物組織，如葉片、根、種子等植物組織中提取核蛋白和其它細胞質(zhì)蛋白。本試劑盒含有的配方能夠有效溶解植物膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。

詳細介紹

保存溫度

2-8℃

注意事項

1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！

有效期

一年

檢測方法

WB,IP等

適用樣本

植物

產(chǎn)品特點

1.使用方便，從細胞，組織中提取蛋白不需經(jīng)過研磨、反復凍融、超聲破碎等前處理。
2.將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
3.含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
4.紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
5.蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白，又可結(jié)合釋出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

產(chǎn)品應用

WB,IP等

儀器準備

1.離心機
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒

試劑準備

1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒

耗材準備

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項

使用注意事項：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
? 蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
? 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
? 如果試劑盒不能短時間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
? 可以根據(jù)自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
?

使用方法

1. 提取液制備：
每500ul預冷的蛋白提取液B中加入2ul蛋白酶抑制劑；每200ul蛋白提取液C中分別加入1ul蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
2. 取洗凈擦干后并去除葉梗和粗脈的100-200mg新鮮植物葉片組織樣本用刀或鋒利的刀片剪切碎，切成0.5mm*0.5mm細塊，加入500ul提取液A，充分混勻。
3. 將懸液置振蕩器上室溫振蕩12-72小時。
4. 在1000×g條件下離心5-10分鐘，棄上清，收集沉淀。
5. 在沉淀中加入500ul提取液B，充分混勻。用勻漿機/Dounce勻漿器充分勻漿。
6. 將勻漿液在800×g離心5分鐘。
7. 收集沉淀I，將上清II移入另一干凈的離心管。
8. 在沉淀I中加入100-200μl冷的提取液C，高速渦旋5秒，充分混勻。
9. 置4℃振蕩20-40分鐘。
10. 在4℃，12000×g條件下離心5分鐘。
11. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即得到核蛋白。
12. 在步驟7中的上清II中加入50ul胞質(zhì)提取液D，高速渦旋振蕩10秒，充分混勻。
13. 置4℃振蕩10分鐘。
14. 在4℃，12000×g條件下離心5分鐘。
15. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即得到細胞質(zhì)蛋白。
16. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?br>

常見問題分析

1.蛋白濃度低？
植物核蛋白豐度比較低，在條件允許的情況下，盡可能增加樣本量。
處理部分樣本時可能沒有裂解，導致蛋白濃度低。只要適當增加試劑B的勻漿次數(shù)，并適當延長試劑A和C的處理時間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份，導致定量不準。如果已經(jīng)進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

3.提取時出現(xiàn)膠狀沉淀？
蛋白提取液處理產(chǎn)物中有時會出現(xiàn)少量透明膠狀物，屬正?，F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復合物。不檢測和基因組DNA結(jié)合特別緊密的特定蛋白的情況下，可以直接離心取上清進行后續(xù)實驗即可；如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理，300w/10秒間隔10秒，超聲3分鐘，隨后離心取上清用于后續(xù)實驗。

4.提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒有對蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。

參考文獻

1.Binhui Zhan , Wenyang Zhao, et al.
Functional Scanning of Apple Geminivirus Proteins as Symptom Determinants and Suppressors of Posttranscriptional Gene Silencing
Viruses. 2018 （IF=3.761）

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