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參考價(jià)	面議

蛋白質(zhì)生物學(xué)

蛋白提取和裂解

細(xì)胞器分離

蛋白純化

蛋白質(zhì)濃縮和緩沖液置換

蛋白定量

蛋白凝膠電泳

免疫組織化學(xué)

貝博生物

產(chǎn)品概述 product description 貝博® BBproExtra® 真菌線粒體蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種真菌樣本中提取線粒體蛋白。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便。制備的線粒體蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。本試劑盒含有的配方能夠有效溶解線粒體膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

詳細(xì)介紹

保存溫度

2-8℃

注意事項(xiàng)

1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

有效期

一年

檢測(cè)方法

WB,IP等

適用樣本

真菌

產(chǎn)品特點(diǎn)

1.使用方便，從細(xì)胞，組織中提取蛋白不需經(jīng)過(guò)研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。
2.將蛋白提取的時(shí)間縮短至1小時(shí)。
3.含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
4.紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。
5.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

產(chǎn)品應(yīng)用

WB,IP等

儀器準(zhǔn)備

1.離心機(jī)
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒

試劑準(zhǔn)備

1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒

耗材準(zhǔn)備

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項(xiàng)

使用注意事項(xiàng)：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。
? 蛋白酶抑制劑在2-8℃時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
? 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
? 如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
? 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
?

使用方法

1. 提取液準(zhǔn)備：
根據(jù)樣本數(shù)量，每500 μl冷的蛋白提取液B中加入2 μl蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
2. 取100 mg-500 mg真菌樣本，用PBS洗一次。離心收集菌體沉淀。
3. 在菌體中加入2 ml提取液A后用勻漿機(jī)/Dounce勻漿器充分勻漿。
4. 將勻漿液在500×g離心5分鐘，棄沉淀，收集上清。
5. 將上清液在1000×g 離心5分鐘，棄沉淀，收集上清。
6. 將上清液在2000×g 離心5分鐘，棄沉淀，收集上清。
7. 將上清在11000×g離心20分鐘，棄上清，留沉淀。
8. 在沉淀中加入100-400 μl蛋白提取液B，充分混勻，在4℃條件下振蕩20-30分鐘，至無(wú)明顯沉淀。
9. 在4℃，14000×g條件下離心15分鐘。
10. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到真菌線粒體蛋白。
11. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

常見(jiàn)問(wèn)題分析

1.蛋白濃度低？
處理部分線粒體樣本時(shí)可能沒(méi)有裂解，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長(zhǎng)試劑C的處理時(shí)間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒(méi)有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。
真菌線粒體蛋白較少，盡可能加大真菌樣品的上樣量。

2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因?yàn)樵噭〢中含有干擾Bradford法的組份，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過(guò)透析處理或者用脫鹽柱改換過(guò)緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

3.提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒(méi)有對(duì)蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。

參考文獻(xiàn)

1.Yuhan Xiao, et al.
Transcription factor MoMsn2 targets the putative 3‐methylglutaconyl‐CoA hydratase‐encoding gene MoAUH1 to govern infectious growth via mitochondrial fusion/fission balance in Magnaporthe oryzae
Environmental Microbiology 2020

2.Lei Chen, et al.
Cinnamaldehyde inhibits Candida albicans growth by causing apoptosis and its treatment on vulvovaginal candidiasis and oropharyngeal candidiasis
Applied Microbiology and Biotechnology 2019



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