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      抗原抗體反應(yīng)是指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)。這種反應(yīng)既可在機(jī)體內(nèi)進(jìn)行，也可以在機(jī)體外進(jìn)行。在機(jī)體內(nèi)，當(dāng)免疫細(xì)胞被抗原激活后，由B細(xì)胞分化成熟為漿細(xì)胞后所合成、分泌的一類能與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白（immunoglobulin，Ig），激活補(bǔ)體系統(tǒng)從而解除抗原對機(jī)體的損傷。


抗原抗體反應(yīng)的主要特點(diǎn)：

1、特異性：特定的抗體只能與特定的抗原（肽段/蛋白）結(jié)合，這在WB一抗二抗的種屬及反應(yīng)性的選擇常用到；

2、比例性：抗原抗體在整個反應(yīng)中存在一定的量比關(guān)系，只有當(dāng)二者濃度比例適當(dāng)時才出現(xiàn)可見反應(yīng)；WB中蛋白上樣量和一抗二抗的稀釋比例與此有關(guān)，實際操作中抗體的量相對較多，這也是為何抗體可以反復(fù)使用的原因之一；

3、可逆性：抗原抗體的結(jié)合是非共價結(jié)合，在一定條件下這種非共價結(jié)合是可逆的；因此，同一NC膜/PVDF膜在Stripping（抗體洗脫）以后可以用來檢測其他蛋白；

4、階段性：抗原抗體特異性反應(yīng)分兩階段，第一階段反應(yīng)迅速，第二階段反應(yīng)緩慢，兩階段均為特異性結(jié)合；WB中抗原抗體結(jié)合在室溫下，反應(yīng)1小時結(jié)合率可達(dá)95%，2小時可達(dá)97%以上；4℃在，反應(yīng)4-6小時可達(dá)90%，8小時可達(dá)95%（本人忘記了具體的數(shù)值，但大致如此）。

影響抗原抗體反應(yīng)的兩個因素：

1、反應(yīng)物自身的因素

抗體：不同來源的抗體,反應(yīng)性各有差異,抗體的濃度、特異性和親和力都影響抗體抗原反應(yīng),為提高試驗的可靠性,應(yīng)選擇高特異性、高親和力的抗體作診斷試劑.等價帶的寬窄也影響抗原抗體復(fù)合物的形成,單克隆抗體不適用于沉淀反應(yīng).

抗原：抗原的理化性狀、分子量、抗原決定簇的種類及數(shù)目均可影響反應(yīng)結(jié)果.顆粒性抗原出現(xiàn)凝集反應(yīng),可溶性抗原出現(xiàn)沉淀反應(yīng),單價抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合不出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象.

2、反應(yīng)環(huán)境條件

酸堿度：抗原抗體反應(yīng)必須在合適的pH環(huán)境中進(jìn)行.蛋白質(zhì)具有兩性電離性質(zhì),因此每種蛋白質(zhì)都有固定的等電點(diǎn).抗原抗體反應(yīng)一般在pH6～9進(jìn)行,有補(bǔ)體參與的反應(yīng)pH為7.7.4,pH過高或過低都將影響抗原與抗體反應(yīng)。

溫度：在一定范圍內(nèi),溫度升高可加速分子運(yùn)動,抗原與抗體碰撞機(jī)會增多,使反應(yīng)加速.一般為15℃～40℃,常用的抗原抗體反應(yīng)溫度為37℃,溫度如高于56℃,可導(dǎo)致已結(jié)合的抗原抗體再解離,甚至變性或破壞.每種試驗都有其du 特的適反應(yīng)溫度要求.此外,適當(dāng)振蕩也可促進(jìn)抗原抗體分子的接觸,加速反應(yīng)。

電解質(zhì)：抗原與抗體發(fā)生特異性結(jié)合后,雖由親水膠體變?yōu)槭杷z體,若溶液中無電解質(zhì)參加,仍不出現(xiàn)可見反應(yīng).為了促成沉淀物或凝集物的形成,常用0.85%NaCl或各種緩沖液作為抗原及抗體的稀釋液。