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原代細胞培養(yǎng)基本流程
閱讀：112 發(fā)布時間：2024-5-27 原代細胞可用來轉染siRNA、antisense RNA、microRNA 等 200bp 以內(nèi)的小分子 RNA 和 DNA，可轉染絕大多數(shù)原代細胞。目前，無論國外還是國內(nèi)，原代細胞的核酸轉染都是個熱點難題，市場還缺乏真正有效的商品化的原代細胞核酸轉染試劑。原代細胞能夠高效轉染絕大多數(shù)原代細胞，獲得比較理想的基因敲除效果。甚至對一些活體寄生蟲幼蟲，也能獲得較為理想的轉染結果。對于大多數(shù)原代細胞，RFect PM 細胞轉染陽性率都在 80%以上，而轉染細胞死亡率不到 10%。
原代細胞培養(yǎng)基本流程：
1、器官和組織的選擇
盡可能的去除不必要的組織和血跡。
2、原代細胞的分離
（1）應用PriCells原代細胞分離試劑盒I、II、III。
（2）根據(jù)組織來源不同，可選用不同的PriCells原代細胞分離試劑盒。
3、原代細胞的培養(yǎng)：
（1）PriCells原代細胞特制培養(yǎng)基
（2）PriCells原代細胞特制添加物
（3）優(yōu)質胎牛血清
4、細胞的培養(yǎng)和鑒定：
PriCells原代細胞鑒定試劑盒
4、原代細胞的傳代、保存
（1）傳代：依椐細胞的生長狀態(tài)，生長的細胞1：2或1：3進行傳代。
（2）保存：DMSO＋培養(yǎng)液＋血清
按下列順序降溫：室溫→4℃（20分鐘）→冰箱冷凍室（30分鐘）→超低溫冰箱（－80℃過夜）→液氮。
5、原代細胞的復蘇
（1）取出細胞，迅速放入37℃溫水中快速解凍。
（2）吸出細胞懸液，并加10倍以上培養(yǎng)液。
（3）用培養(yǎng)液適當稀釋后接種培養(yǎng)瓶，放入37℃CO2培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。