化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：非凍型唾液DNA保存液
產(chǎn)品貨號(hào)：FS-P013312
產(chǎn)品規(guī)格： 250 mL
產(chǎn)品分類(lèi)：純化試劑盒
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物） 3．10×PCR Buffer 4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5．Taq酶 | 二、操作步驟 1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1（10pM） 2μl 引物2（10PM） 2μl Taq酶（2U/μl） 1μl DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。 2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。 3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。 4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。 |
注意事項(xiàng)
1.公司產(chǎn)品僅用于科研整個(gè)檢測(cè)過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照本說(shuō)明書(shū)要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用，不能混用；實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解，樣本處理過(guò)程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè)；樣本處理過(guò)程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過(guò)無(wú)核酶處理。
3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽(yáng)性對(duì)照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨(dú)存放。
6.為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說(shuō)明書(shū)相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號(hào)試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無(wú)害化處理后方可丟棄。
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
CD44 ELISA Kit 大鼠CD44分子Multi-class antibodies： 48T
TGF- Beta 1 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1抗體Multi-class antibodies： 0.1ml
Rhesus antibody Rh GNMT 甘-N-甲基轉(zhuǎn)移 0.2ml
C I CP(Mouse cross-linked C-telopeptides of Type I collagen) ELISA Kit 小鼠Ⅰ型前膠原C末端肽 96T
Nucleolar protein 3 核仁蛋白3抗體 0.2ml
BAT5 白細(xì)胞抗原B相關(guān)轉(zhuǎn)錄蛋白5抗體 0.2ml
TGF- Beta 1 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1抗體Multi-class antibodies： 0.1ml
IGF-2(Human insulin-like growth factors 2) ELISA Kit 人胰島樣生長(zhǎng)因子2Multi-class antibodies： 48T
Phospho-GRM2/GLUR2 (Tyr876) 磷化促代謝型谷受體2抗體Multi-class antibodies： 0.1ml
Rhesus antibody Rh MO25 alpha/CAB39 鈣結(jié)合蛋白39抗體 0.1ml
Human Nephrin ELISA Kit 人蛋白 96T
RASSF2 Ras相關(guān)結(jié)構(gòu)域蛋白質(zhì)2抗體 0.2ml
phospho-Crkl(Tyr251) 磷化接頭蛋白CrkL抗體 0.1ml
Phospho-GRM2/GLUR2 (Tyr876) 磷化促代謝型谷受體2抗體Multi-class antibodies： 0.1ml
Rabbit human IgM/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗人IgM 0.1ml
GPR161 G蛋白偶聯(lián)受體GPR161蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh alpha-Synuclein(NT) 核突觸蛋白-α抗體(N端) 0.1ml
Kiss-1/FITC 熒光標(biāo)記轉(zhuǎn)移抑制基因抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Guinea pig IgM/HRP 辣根過(guò)氧化物標(biāo)記的兔抗豚鼠IgM 0.1ml
Skp2/FITC 熒光標(biāo)記細(xì)胞S相激相關(guān)蛋白抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
非凍型唾液DNA保存液小鼠鈣結(jié)合蛋白S100A6（S100A6） elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠促胰液（SCT）elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠核孔蛋白214（NUP214）elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠氧化低密度脂蛋白抗體（OLAb）elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠G蛋白信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白4（RGS4）elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠雙調(diào)蛋白（AR）elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠組蛋白H2b（histon-H2b）elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(lèi)（MHCⅠ/H-2Ⅰ）elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠肝核因子1α（HNF1a）elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠白介18結(jié)合蛋白（IL18BP）elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠糖原合成3α（GSK3a）elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠L丙解氨（PAL）elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠基質(zhì)金屬蛋白3（MMP-3）elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠IgG Fc片段（IgG-Fc）elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠神經(jīng)粘附分子（NCAM/CD56）elisa檢測(cè)試劑盒
化工儀器網(wǎng)