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詳細(xì)介紹
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：羊源性成分核酸檢測試劑盒48T0.1PCR管
產(chǎn)品貨號：FS-02R6391
產(chǎn)品規(guī)格：48T 0.1PCR管
產(chǎn)品分類：PCR-熒光探針法
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物） 3．10×PCR Buffer 4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5．Taq酶 | 二、操作步驟 1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1（10pM） 2μl 引物2（10PM） 2μl Taq酶（2U/μl） 1μl DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。 2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。 3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。 |
注意事項(xiàng)
1.公司產(chǎn)品僅用于科研整個(gè)檢測過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用，不能混用；實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨(dú)存放。
6.為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9.實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。
MK6/FITC 熒光標(biāo)記原活化蛋白激MKK6抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
TP I /FITC 熒光標(biāo)記拓普西異構(gòu)Ⅰ抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh ABI2 抑制基因ABI2/精酪蛋白激結(jié)合蛋白抗體 0.2ml
Rabbit Avidin/Cy7 Cy7標(biāo)記的兔抗親和 0.1ml
phospho-GCN2 (Thr667) 磷化蛋白激GCN2蛋白抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Avidin whole serum 兔抗親和抗血清 1ml
TP I /FITC 熒光標(biāo)記拓普西異構(gòu)Ⅰ抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
ENK(Human enkephalin) ELISA Kit 人腦啡肽Multi-class antibodies： 48T
HBA1/Alpha globin 血紅蛋白α1抗體Multi-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh MKRN2/RNF62 環(huán)指蛋白62抗體 0.2ml
Casp-9(Human Caspase-9) ELISA Kit 人胱天蛋白9 96T
RhoA RhoA抗體 0.1ml
Chimaerin 2 嵌合蛋白2/β2-chimaerin抗體 0.1ml
HBA1/Alpha globin 血紅蛋白α1抗體Multi-class antibodies： 0.2ml
Rabbit Goat IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗羊IgG 0.1ml
GABRA4 G基丁A型受體α4/GABAA Rα4抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh ADK/AK 腺苷激抗體 0.1ml
HRH4/GPCR105/FITC 熒光標(biāo)記組織胺H4受體抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit chicken IgM/HRP 辣根過氧化物標(biāo)記的兔抗雞IgM 0.1ml
Synapsin II /FITC 熒光標(biāo)記神經(jīng)突觸2抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
羊源性成分核酸檢測試劑盒48T0.1PCR管母丁香Clove mother
椿皮Cortex ailanthi
土鱉蟲（地鱉）Eupolyphaga sinensis Walker?（ESS）
山茱萸Cornus officinalis
匙羹藤葉Gymnema sylvestre?leaf
土荊芥Chenopodium ambrosioides
大葉骨碎樸Lobar?drynaria rhizome
垂盆草Sedum sarmentosum
粘委陵菜Sticky?cinquefoil
白蘞Ampelopsis japonica
五指柑Wuzhigan
黑老虎根The black tiger?root
茅膏菜Sundew
南沙參Nansha ginseng
黃精（制）Huang Jing?（sFStem）
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