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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | A01X1735 | 主要用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
| 組織來源 | 牙組織 | 種屬來源 | 大鼠 |
詳細(xì)介紹
大鼠牙髓干細(xì)胞
培養(yǎng)基：原代間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)體系
傳代特性：根據(jù)細(xì)胞特性傳代
消化液：0.25%胰dan白酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣 ，95%； CO2 ， 5%
細(xì)胞簡介：干細(xì)胞是一類具有自我更新和分化潛能的細(xì)胞 ，它包括胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞 。 目前已經(jīng)成功分離培養(yǎng)包括來自骨髓、肌肉、神經(jīng)、上皮等組織的成體干細(xì)胞 。牙髓干細(xì)胞是位于牙髓組織的一種成體干細(xì)胞。 2000年 ，Gornhtos等首先成 功地分離培養(yǎng)出人牙髓干細(xì)胞 ，為干細(xì)胞的研究開辟了一個(gè)新的領(lǐng)域。牙髓干細(xì) 胞具有同其他成體干細(xì)胞相似的生物學(xué)特性,具有較強(qiáng)的克隆形成能力 ，可以分化 為牙髓組織中的終末功能細(xì)胞并具有一定的橫向分化能力。 目前國內(nèi)外只有人牙 髓干細(xì)胞培養(yǎng)成功的報(bào)道,鼠牙髓干細(xì)胞的相關(guān)研究國內(nèi)外還未見報(bào)道 ，而鼠是實(shí) 驗(yàn)研究常用的模型,它具有取材容易、與人同源性較高等優(yōu)點(diǎn)。
一、細(xì)胞基本屬性
細(xì)胞名稱 | 大鼠牙髓干細(xì)胞 | 商品貨號 | A01X1735 |
組織來源 | 牙組織 | 種屬來源 | 大鼠 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 生長特性 | 貼壁生長 |
換液頻率 | 每2-3天換液一次 | 細(xì)胞形態(tài) | 長梭形細(xì)胞 |
原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：
取材--分離--培養(yǎng)--鑒定
首先將組織從機(jī)體中取出，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定。
實(shí)驗(yàn)步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì)。
五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液。
公司正在出售的產(chǎn)品：
小鼠大隱靜脈平滑肌細(xì)胞 | HCC-1195細(xì)胞 |
Rho鳥苷交換因子2重組兔單克隆抗體 | 志賀氏菌菌體蛋白抗體 |
GRANTA-519細(xì)胞 | 血小板源性生長因子A相關(guān)蛋白2抗體 |
GR-M細(xì)胞 | 磷化磷酯Cγ2抗體 |
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HCC1143細(xì)胞 | 蛋白體激活因子PA28γ抗體 |
HCC-1171細(xì)胞 | 自噬體ATG16L2蛋白抗體 |
HCC2157細(xì)胞 | 電壓門控鉀通道Kv4.1抗體 |
注意事項(xiàng)：
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，yi酶消化時(shí)間不宜過長，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
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