人食管成纖維細胞公司正在出售的產品：小鼠垂體促甲狀腺濾泡星狀細胞TtT/GF(種屬鑒定)人肺腺癌細胞LTEP-α-2(STR鑒定正確)小鼠乳腺癌細胞轉染4T1+OVA(STR鑒定正確)大鼠脊髓前角運動神經元瘤細胞 VSC4.1（種屬鑒定）人類星形膠質瘤耐替莫細胞U251MG+TMZ+luc(STR鑒定正確)人正常前列腺上皮細胞RWPE-2(STR鑒定正確)人結腸直腸腺癌細胞SW1417(STR鑒定

一、細胞基本屬性

 

組織來源：食管組織

種屬來源：人

細胞簡介：食管是咽和胃之間的消化管，哺乳動物的食管結構上由內向外分四層:黏膜層、黏 膜下層、肌層、外膜。成纖維細胞是疏松結締組織的主要細胞成分，其中外膜主 要都是成纖維細胞構成的疏松結締組織，  食管通過其與食管周圍的器官相連。黏  膜下層,為厚的疏松結締組織構成,內部包含食管腺，  可分泌粘液排入食管腔。  食管 癌的發(fā)生中由正常成纖維細胞轉化而來的活化的癌相關纖維母細胞是腫瘤間質微 環(huán)境內的主要效應細胞，  研究證實，  包括食管癌在內的多種腫瘤組織內的癌相關 纖維母細胞，與正常成纖維細胞相比，在形態(tài)結構、生長方式、增殖活性、運動 能力等發(fā)面均發(fā)生了顯著變化，  并且能夠分泌大量的促進腫瘤細胞增殖、血管新 生的信號分子以介導上皮-間質之間復雜的相互作用。

培養(yǎng)基：原代成纖維細胞培養(yǎng)體系

換液頻率:每2-3天換液一次

生長特性：貼壁培養(yǎng)

細胞形態(tài)：成纖維樣細胞

傳代特性：細胞特性確定傳代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：  空氣，95%；CO2 ，5%

二、細胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片

三、使用方法

人食管成纖維細胞是一種貼壁培養(yǎng)細胞，細胞形態(tài)呈成纖維樣細胞，在技術部標準操作流程下，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。

客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。

1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)經1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內；

4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱)。

5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。

四、注意事項

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中，消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和技術部溝通；由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

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