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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 48T/96T |
|---|---|---|---|
| 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) | 主要用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
| 英文名稱 | Mouse Protein Kinase B Gamma(PKBg)ELISA Kit | 貨號 | A106793 |
| 儲存條件 | 2-8°C冷藏 | 使用方法 | 競爭法、夾心法、間接法 |
詳細(xì)介紹
ELISA技術(shù)的*性：
（一）靈敏度高
雖然酶活性調(diào)節(jié)ELISA方法的靈敏度目前并不十分理想，但在酶活性放大ELISA中，檢測的靈敏度遠(yuǎn)比RIA高。根據(jù)質(zhì)量作用定律。即免疫反應(yīng)所形成的免疫復(fù)合物量與反應(yīng)物濃度成正比。推測所檢測的待測物分子數(shù)為1。已知1個(gè)摩爾濃度含6.02×1023個(gè)分子，那么理論推測酶活性放大Elisa方法的zui低檢測限可達(dá)1.7×10-24mol/L。雖然在實(shí)際應(yīng)用中由于反應(yīng)條件和試劑純度以及儀器精度等因素的影響，往往達(dá)不到這個(gè)水平（大于104個(gè)分子），但表明Elisa在靈敏度方面的改進(jìn)潛力是很大的。
（二）特異性強(qiáng)
從免疫反應(yīng)的角度來說，Elisa與RIA的特異性應(yīng)該是。但在ELISA方法中，由于作用檢測指示劑的酶與其底物的反應(yīng)有專一性，從而增加了該方法的特異性。
（三）對儀器設(shè)備要求不高，測定成本低
Elisa測定在普通實(shí)驗(yàn)室便可進(jìn)行，常用的儀器設(shè)備包括加樣器、培養(yǎng)箱、酶標(biāo)專用讀數(shù)器等。按現(xiàn)有價(jià)格折算，酶標(biāo)儀的價(jià)格只及液閃儀的1/6至1/4，因此每測定一個(gè)樣本所需成本不及PIA的1/10至1/16。某些定性Elisa方法，還可在野外進(jìn)行，操作十分方便。
（四）方法快速、簡便
均質(zhì)酶免疫測定方法操作時(shí)，所有反應(yīng)試劑均在同一體系內(nèi)進(jìn)行，不需任何分離步驟，操作十分簡便、快速，數(shù)分鐘便能得出結(jié)果。某些定性Elisa試劑盒，如國外生產(chǎn)的某些奶牛發(fā)情鑒定和妊娠診斷Elisa試劑盒，數(shù)分鐘時(shí)間便能完成一次測定。
（五）試劑保存時(shí)間較長
作為檢測指示劑用的酶和酶標(biāo)記物，在低溫或干燥條件下相對穩(wěn)定，可保存半年至數(shù)年之久。
（六）自動(dòng)化程度高
Elisa由于不存在放射性同位素污染，因此，除加待測樣本需要人工操作外，其他各步驟均可用儀器自動(dòng)化完成。在這種自動(dòng)化條件下，平均每人每天可完成2000余個(gè)樣本的檢測工作。
（七）方法種類多
ELISA技術(shù)可以充分利用單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)，并能利用某些非免疫反應(yīng)試劑（如SPA、凝集素等）的作用，發(fā)展成為許多新方法。此外，發(fā)展Elisa技術(shù)還可以從酶及其底物兩方面著手。這是因?yàn)橛糜贓LISA技術(shù)的酶其種類遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于可用作RIA檢測指示劑的放射性同位素。生物界的酶多種多樣，有希望開發(fā)很多類型的酶用于Elisa，并建立相應(yīng)的ELISA方法。相反，自然界的化學(xué)元素是有限的，放射性同位素的種類更加有限。第二，由于酶的多樣性，酶作用底物也有多種多樣，與此相對應(yīng)的生色源或供氫體的種類也有遠(yuǎn)大的開發(fā)和發(fā)展?jié)摿Α?/span>
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
PKBγ小鼠蛋白激酶BγELISA試劑盒 | Mouse Protein Kinase B Gamma(PKBg)ELISA Kit | 48T/96T | A106793 |
公司產(chǎn)品僅用于科研組成及試劑配制 :
1. 酶聯(lián)板（Assay plate ）：一塊（96孔）。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品（Standard）：2瓶（凍干品）。
3. 樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4. 標(biāo)記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6. 標(biāo)記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9. 濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10. 終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
ELISA試劑盒的組成:
試劑盒組成 | 48 孔配置 | 96 孔配置 | 保存 |
說明書 | 1 份 | 1 份 | |
封板膜 | 2 片（48） | 2 片（96） | |
密封袋 | 1個(gè) | 1個(gè) | |
酶標(biāo)包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 0.5ml×1 瓶 | 0.5ml×1 瓶 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 1.5ml×1 瓶 | 1.5ml×1 瓶 | 2-8℃保存 |
酶標(biāo)試劑 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1 瓶 | 2-8℃保存 |
樣品稀釋液 | 3 ml×1 瓶 | 6 ml×1 | 2-8℃保存 |
顯色劑A 液 | 3 ml×1 瓶 | 6 ml×1 瓶 | 2-8℃保存 |
顯色劑B 液 | 3 ml×1 瓶 | 6 ml×1 瓶 | 2-8℃保存 |
20 倍濃縮洗滌液 | 20ml×1 瓶 | 30ml×1 瓶 | 2-8℃保存 |
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操作步驟：
1.編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號，每板應(yīng)設(shè)陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）
2.加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50μl。然后在待測樣品孔先 加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，
3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用。
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復(fù) 5 次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同 3。
8.洗滌：操作同 5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10 分鐘.
10.終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
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