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ELISA技術的*性：

（一）靈敏度高

雖然酶活性調節(jié)ELISA方法的靈敏度目前并不十分理想，但在酶活性放大ELISA中，檢測的靈敏度遠比RIA高。根據(jù)質量作用定律。即免疫反應所形成的免疫復合物量與反應物濃度成正比。推測所檢測的待測物分子數(shù)為1。已知1個摩爾濃度含6.02×1023個分子，那么理論推測酶活性放大Elisa方法的zui低檢測限可達1.7×10-24mol/L。雖然在實際應用中由于反應條件和試劑純度以及儀器精度等因素的影響，往往達不到這個水平（大于104個分子），但表明Elisa在靈敏度方面的改進潛力是很大的。

（二）特異性強

從免疫反應的角度來說，Elisa與RIA的特異性應該是。但在ELISA方法中，由于作用檢測指示劑的酶與其底物的反應有專一性，從而增加了該方法的特異性。

（三）對儀器設備要求不高，測定成本低

Elisa測定在普通實驗室便可進行，常用的儀器設備包括加樣器、培養(yǎng)箱、酶標專用讀數(shù)器等。按現(xiàn)有價格折算，酶標儀的價格只及液閃儀的1/6至1/4，因此每測定一個樣本所需成本不及PIA的1/10至1/16。某些定性Elisa方法，還可在野外進行，操作十分方便。

（四）方法快速、簡便

均質酶免疫測定方法操作時，所有反應試劑均在同一體系內進行，不需任何分離步驟，操作十分簡便、快速，數(shù)分鐘便能得出結果。某些定性Elisa試劑盒，如國外生產的某些奶牛發(fā)情鑒定和妊娠診斷Elisa試劑盒，數(shù)分鐘時間便能完成一次測定。

（五）試劑保存時間較長

作為檢測指示劑用的酶和酶標記物，在低溫或干燥條件下相對穩(wěn)定，可保存半年至數(shù)年之久。

（六）自動化程度高

Elisa由于不存在放射性同位素污染，因此，除加待測樣本需要人工操作外，其他各步驟均可用儀器自動化完成。在這種自動化條件下，平均每人每天可完成2000余個樣本的檢測工作。

（七）方法種類多

ELISA技術可以充分利用單克隆抗體的優(yōu)點，并能利用某些非免疫反應試劑（如SPA、凝集素等）的作用，發(fā)展成為許多新方法。此外，發(fā)展Elisa技術還可以從酶及其底物兩方面著手。這是因為用于ELISA技術的酶其種類遠遠多于可用作RIA檢測指示劑的放射性同位素。生物界的酶多種多樣，有希望開發(fā)很多類型的酶用于Elisa，并建立相應的ELISA方法。相反，自然界的化學元素是有限的，放射性同位素的種類更加有限。第二，由于酶的多樣性，酶作用底物也有多種多樣，與此相對應的生色源或供氫體的種類也有遠大的開發(fā)和發(fā)展?jié)摿Α?/span>
產品屬性：

公司產品僅用于科研組成及試劑配制 :

1. 酶聯(lián)板（Assay plate ）：一塊（96孔）。

2. 標準品（Standard）：2瓶（凍干品）。

3. 樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。

4. 標記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。

5. 辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。

6. 標記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）

7. 辣根過氧化物酶標記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）

8. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。

9. 濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。

10. 終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

ELISA試劑盒的組成:

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操作步驟：

1.編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）

2.加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50μl。然后在待測樣品孔先 加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，

3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復 5 次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同 3。

8.洗滌：操作同 5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10 分鐘.

10.終止：每孔加終止液 50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11.測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止 液后 15 分鐘以內進行。

PILRB/AP，堿性磷suanmei（AP）標記的細胞表面受體PILRβ抗體

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phospho-NFKB p65(Thr254)/AP，堿性磷suanmei（AP）標記的磷suan化細胞核因子抗體

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