儲存條件：
14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
服務(wù)流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。

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實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
     Taq酶（2U/μl）            1μl
     DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
      加ddH2O至               50 μl
    視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
正庚烷(無水級,99%)CD3 (17A2) Rat mAb (APC Conjuga)噻唑

三十六烷(standard for GC,≥98.0%(GC))PHB1 Antibody基肼鹽酸鹽

三十六烷(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.0%(GC))PHB1 Antibody4,5,6,7-四氫噻吩[3,2-c]吡啶鹽酸鹽

alpha-六六六標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=3%)EML4 Antibody2-甲基基

alpha-六六六標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=6%)Met (D1C2) XP® Rabbit mAb  (HRP Conjuga)雙酮酰

alpha-六六六標(biāo)準(zhǔn)溶液(50μg/mL,分析標(biāo)準(zhǔn)品)Thioredoxin 1 (C63C6) Rabbit mAb溴吲哚-2-甲酸

正十六烷(Standard for GC,>99.5%(GC))NeuN (D4G4O) XP® Rabbit mAbN-叔丁基-5-溴-2-噻吩磺酰

正十六烷(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC))NeuN (D4G4O) XP® Rabbit mAb基肼鹽酸鹽

正己(Standard for GC,>99.5%(GC))PPARγ (D69) Antibody1,2-環(huán)氧環(huán)戊

正己(分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99.8%(GC))Phospho-Shc (Tyr317) Antibody1H-并咪唑-2-甲酸

十六(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC))CD16 (D1N9L) Rabbit mAbDL-alpha-甘氨酸

正庚酸(Standard for GC)Shc Antibody溴

正庚酸(標(biāo)準(zhǔn)品)Calnexin Antibody2-甲基-3,5-二甲酸

1,6-己二(standard for GC)Phospho-Shc (Tyr239/240) Antibody2-溴-6-羥基吡啶

2-庚酮(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.8%(GC))Phospho-Shc (Tyr239/240) Antibody6-氟吲哚-甲

十七烷(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC))PPARγ (C26H12) Rabbit mAb氨基-2--硝基吡啶

三十一烷(Standard for GC≥97.0%(GC))PPARγ (C26H12) Rabbit mAb甲氧基

二十六烷(分析標(biāo)準(zhǔn)品, ≥99.5% (GC))SCD1 (M38) Antibody叔丁基-吡唑-5-
轉(zhuǎn)基因品系馬鈴薯SPBT02-7 PCR試劑盒100mg500g1丁萘Lipoxygenase

川陳皮素 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢 人羥基-輔酶A脫氫酶,線粒體(HADH)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/ml小鼠胱硫β合酶(CβS)ELISA試劑盒，英文名：CβS ELISA Kit

培養(yǎng)基,培養(yǎng)基, 二鈉培養(yǎng)基

5g25g1丁萘Invertase

4-氧基-2-羥基二甲(>97.0%(HPLC)(T)) 質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(HPLC)(T) 4-Allyloxy-2-hydroxybenzophene 釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

培養(yǎng)基,培養(yǎng)基, VP半固體瓊脂

25g100g(E)3吲哚sucrose phosphate syn thase

測定二氧化配套試劑（含儲備液、0. 訂購|咨詢 規(guī)格： 3支/套 晶狀體蛋白2抗體 FⅧ ELISA Kit 凝血因子Ⅷ(FⅧ)ELISA試劑盒

培養(yǎng)基,培養(yǎng)基, 40%尿素水